改良山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂

qPCR 实验中遇到这 3 个问题怎么办？

荧光定量 PCR 的常见异常结果除了扩增曲线异常、融解曲线异常两类常见情况外，qPCR 实验中通常还会遇到以下三大类情况： 1. 复孔间重复性差怎么办？ 复孔间重复性差一般会有以下两种情况： （1）CT 值很大，如 CT≥ 30，重复性差属于正常现象。该现象符合泊松分布，即在有效模板量很少的情况下，模板与引物的碰撞存在随机性，直接导致复孔间的 CT 值差异较大。 解决方法：如果融解曲线没有杂峰，无模板阴性对照同目的基因的 △CT 值为 3 or 5 以上，那 CT 值为准确的，可多设置

学会这 8 个qPCR 操作，每天都有阳性 data ！

装备很重要：做出心中的梦中情图，最基本的一步就是拥有一把好用的移液枪，保证其量程是准确的，且每次做 RT-qPCR 的时候要固定使用那一把移液枪，避免造成因枪的不同带来的误差。 保证 RNA 质量：A260/A280要在 2 左右；不同组的样品 cDNA 的浓度也要一致，只有这样你所要扩增的模板的基线才是一致的，后续出来的 CT 值才有参考意义。 反复确认引物种属：很多刚接触实验的小白们，拿着 human 的引物在鼠样本上做 RT-qPCR，，也许跑到天荒地老这个结果也无法得到，既浪费

常用培养基配方（七）

，再加入氯化钠30g，分装试管，121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。66 氯化钠血琼脂成分:酵母膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 70g磷酸氢二钠 5g甘露醇 10g结晶紫 0.001g琼脂 15g蒸馏水 1000mL制法:调pH8.0加热30min(不必高压)，待冷至45℃左右时，加入新鲜人或兔血(5%～10%)混合均匀，倾注平皿。67 3.5%氯化钠生化试验培养基成分及制法:根据所需糖的种类按3.2配制。只是将氯化钠含量改为3.5%，pH为7.7。 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔