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- 2025年07月10日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
参考说明书
- 保质期：
参考说明书
- 英文名：
参考说明书
- 库存：
大量
- 供应商：
上海羽朵
- 规格：
10次
活体组织线粒体内膜功能（膜电位）荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
活体组织线粒体内膜功能（膜电位）荧光测定试剂是一种旨在通过高度敏感的阳离子荧光羰花青染料结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，即内膜电负性的增高或降低，来分析线粒体内膜功能完整性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种活体组织线粒体的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简易，性能稳定。
技术背景
阳离子荧光羰花青染色剂JC-1（5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一种对膜电位高度敏感的染色剂。它特异性地进入线粒体，分布和结合在线粒体基质上。线粒体膜电位的高低变化决定了JC-1的分布浓度。电位高，JC-1形成聚集体，而浓度高，荧光显色为红色或桔红色；反之，则为绿色。荧光减弱表明线粒体内膜功能受到损害。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
染色液（Reagent B） 微升
稀释液（Reagent C） 毫升
裂解液（Reagent D） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B）避免光照；有效保证6月
用户自备
24孔细胞培养板：用于活体组织线粒体染色的容器
DOUNCE匀浆器：用于制备组织裂解悬液
微型台式离心机：用于组织成分的制备
培养箱：用于染色孵育
96孔板或比色皿：用于荧光定量分析的容器
荧光显微镜：用于活体组织细胞线粒体荧光定性分析
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于活体组织细胞线粒体荧光定量分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent C）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent C），混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。
- 直接法－荧光显微镜检测
- 准备1个24孔细胞培养板
- 放进新鲜切除的动物组织样本（注意：建议组织大小为0.5厘米；如果过大，最好刀切处理一下）
- 将组织压平
- 小心加入xx毫升37℃预热的清理液（Reagent A），清洗组织样本
- 小心抽去清理液
- 小心加入xx微升染色工作液，浸没整个组织
- 放进37℃培养箱，孵育20分钟，避免光照
- 小心抽去染色液
- 小心加入xx 37℃预热的清理液（Reagent A），清洗组织样本
- 小心抽去清理液
- 重复实验步骤9至10二次
- 后续切片（100微米厚）
- 置于载波片上
- 盖上盖玻片，用手指轻轻压平
- 即刻在荧光显微镜或共聚焦显微镜下进行观察（单滤波或双滤波），通过电脑软件分析荧光强度：
观察绿色荧光：
- 间接法－荧光分光光度仪测定
- 准备1个24孔细胞培养板
- 放进新鲜切除的动物组织样本（注意：建议组织大小为0.5厘米；如果过大，最好刀切处理一下）
- 将组织压平
- 小心加入xx毫升37℃预热的清理液（Reagent A），清洗组织样本
- 小心抽去清理液
- 小心加入xx微升染色工作液，浸没整个组织
- 放进37℃培养箱，孵育20分钟，避免光照
- 小心抽去染色液
- 小心加入xx毫升37℃预热的清理液（Reagent A），清洗组织样本
- 小心抽去清理液
- 重复实验步骤9至10二次
- 小心加xx毫升裂解液（Reagent D）
- 涡旋震荡5秒，充分混匀
- 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
- 在冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）
- 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管
- 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为1500g
- 小心移出100微升上清液到黑色96孔板里或100微升比色皿里
- 即刻进行荧光分光光度仪或荧光酶标仪测定（单一测定或双重测定）：
注意事项
- 本产品为10次操作
- 操作时，须戴手套
- 待测动物（组织）建议不要过于饥饿或过度生长
- 原始组织大小0.5厘米为佳，但建议越小越佳
- 染色工作液避免光照
- 用户根据实际需求，按比例配制试剂用量
- 建议组织染色完成后，即刻进行荧光检测分析
- 孵育时，必须避免光照
- 活体组织检测建议采用双滤波或双重测定：健康组织细胞和线粒体呈现红色；死亡或凋亡组织细胞及损伤线粒体呈现绿色
- 全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限
- 本公司提供系列线粒体试剂产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定荧光清晰
使用承诺
上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
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文献和实验性起调节作用。很多凋亡的关键步骤包括caspase激活物的释放和电离子通道的改变，以及线粒体膜电位差的丢失等都发生于线粒体，因此线粒体 对凋亡的发生或抑制起重要作用。 (一)细胞色素C释放与凋亡复合体的形成 在研究哺乳细胞凋亡的生物化学反应时，发现某些位于线粒体内膜的蛋白可以直接启动细胞凋亡，并导致细胞色素C释放到细胞质或细胞核。被释放的细胞色素C可以和Apaf―1结合，改变其构象，大大增加后者与dATP／ATP的亲和性，并且使细胞色素C―Apaf―1形成多聚体。与此
信号启动的ATP依赖的GSH转移系统。当细胞内GSH的排除非常活跃时，细胞液就由还原环境转为氧化环境，这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低，从而使细胞色素C(三羧酸循环中的重要组分)从线粒体内转移到细胞液中，启动凋亡效应器caspase的级联反应。 由于 GSH与氧化还原作用及线粒体 功能密切相关，此项检测除了对研究细胞凋亡的起始非常有用外，还可用于心脏病、中风等疾病治疗的研究。但有些细胞如：HeLa 和3T3细胞凋亡时没有明显的GSH水平的变化，不能用此法检测。
的排除非常活跃时，细胞液就由还原环境转为氧化环境，这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低，从而使细胞色素C（三羧酸循环中的重要组分）从线粒体内转移到细胞液中，启动凋亡效应器caspase的级联反应。由于 GSH与氧化还原作用及线粒体功能密切相关，此项检测除了对研究细胞凋亡的起始非常有用外，还可用于心脏病、中风等疾病治疗的研究。但有些细胞如：HeLa 和3T3细胞凋亡时没有明显的GSH水平的变化，不能用此法检测。3、细胞色素C的定位检测：细胞色素C作为一种信号物质，在细胞凋亡中发挥着重要的作用
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