羊抗鼠IgG-辣根酶结合物

酶标抗体的鉴定

1．酶标抗体的活性鉴定 一般以 琼脂 扩散和免疫电泳进行鉴定。使酶标抗体和相应的抗原(抗原浓度为1mg/ml)产生沉淀线,洗涤后于底物溶液中显色,显色后用生理盐水漂洗,沉淀线不褪色,说明酶和抗体都具有活性。良好的酶标结合物 琼脂 扩散滴度一般应在1：16以上。 2．酶结合物的定量测定 包括酶量、IgG含量、酶与IgG克分子比值以及结合率的测定。 酶量(µg/ml)=OD 403

ELISA中的试剂－结合物

的，较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度，但其偶联的有效率较一步法低。 （2）过碘酸盐氧化法：本法只适用于含糖量较高的酶。辣根过氧化物酶的标记常用此法。反应时，过碘酸钠将HRP分子表面的多糖氧化为醛基很活泼，可与蛋白质上的氨基形成Schiff氏碱而结合。酶标记物按克分子比例联结，其最佳比例为：酶/抗体=1-2/1。此法简便有效，一般认为是HRP最可取的标记方法，但也有人认为所有试剂较为强烈，各批实验结果不易重演。 按以上方法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和抗体。理论上，结合物中

免疫斑点试验(Dot Immunobinding Assay, DIBA)

蛋白质等生物大分子 。因而，将抗原吸附于纤维素膜后，就可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。当加入抗体后(即可与膜上的抗原结合，犎;后再加入带有标记物的抗体，使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜上。加入标记物相应的底物后，标记物即可与底物作用形成不溶性产物,呈现斑点状着色,从而判定结果。根据所用的标记物不同，可分为：辣根过氧化物酶免疫斑点试验（使用辣根过氧化物酶作为抗抗体的标记物)，碱性磷酸酶免疫斑点试验(使用硷性磷酸酶抗硷性磷酸酶复合物作为酶标记物)和金银染色免疫斑点试验(使用胶体