
【免疫组织化学】IHC
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- 2025年07月16日
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技术应用
提高病理诊断准确性
激素受体及生长因子的检测对预后及治疗的意义
癌基因蛋白的临床应用
对肿瘤增生程度的评价
指导肿瘤的治疗
检测病原微生物等
技术优势
能将目地抗原的表位及表达量直观的呈现出来
质控
如需验证待检组织或细胞是否存在目的抗原或研究表达量,则客户提供阳性对照样本,以便在正式实验中设置阳性对照。
如需测试实验体系的可靠性,则客户提供阴性对照样本,以便在正式实验中设置阴性对照。
服务流程
收样标准
1) 组织取材要求:取黄豆大小约100mg新鲜组织。
2) 石蜡切片:将组织放入固定液体积与组织体积比为10:1~20:1之间的10%福尔马林或4%多聚甲醛溶液中固定,组织经包埋、切片后还需置60℃烤片2h以上方可-20℃长期保存,4℃或室温短期保存。
3) 冰冻切片:采集标本→割取所需组织→固定(4%PFA、4度固定)→PBS冲洗→脱水(30%蔗糖)至组织沉降→OCT包埋→用恒冷箱切片机切片(一般-22℃),片厚10μm。做好的切片,可在-80℃、-20℃保存,但最好尽快用于后续实验。
4) 细胞样本:在多孔板里做好细胞爬片,用PBS 洗2 次,然后用4%多聚甲醛4℃固定30min,换PBS 中4℃保存。
交付周期
从收到组织或细胞样本之日起,一般为5个工作日内交付实验报告及图片,如有变动,将会另外通知。
实例结果
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文献和实验免疫组织化学对照实验 由于影响免疫组织化学染色结果的因素甚多,染色中必须有对照实验,否则不可能正确评价染色结果。对照实验包括阴性对照、阳性对照和自身对照。在实践中可用染色组织切片中不含抗原的组织作为阴性对照.而用含抗原的正常组织 作阳性对照,这种自身对照具有节约的意义。观察染色结果时,先观察对照组织的结果,如阳性对照组织中阳性细胞呈强阳性,阴性对照细胞呈阴性,内源酶阴性,背景无非特异性染色时,表明本次实验的全部试剂和全过程技术操作准确无误,待检组织中的阳性细胞具有可信
免疫组织化学基本原理 直接法 直接法用酶或其他标记物标记的特异性抗体直接与标本中的相应抗原结合,再与酶的底物作用产生有色产物,沉积在抗原抗体反应的部位,即可对抗原进行定性、定位以至定量研究。直接法简便、快速且特异性强,非特异性背景反应低;其缺点是每种抗原必须分别用酶标记的特异性抗体,故很难获得各种市售标记特异性抗体。直接法敏感性较低,对组织或细胞内抗原量少的样品。难以达到检测目的。 免疫纽织化学直接法与间接法示意圈 三、间接法 第一抗体 不标记,使用
免疫组织化学染色结果评价 对免疫 组织化学染色所得结果的判断要持科学态度,根据对照实验准确判断阳性和阴性结果,排除假阳性和假阴性结果。为使实验结果准确无误,应多次重复进行实验。最后得出科学的结论。为达此目的,首先应学会区别特异性和非特异性染色结果。非特异性染色的特点是:细胞和间质染色无区别或间质染色更强;染色无特定部位,无结构性;染色五分布规律,某一部位均匀着色;染色出现在切片的干燥部位、边缘、刀痕或组织折叠处。排除非特异性染色之后,应确定特异性染色在组织细胞中的部位
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