WB-0081 2×SDS 蛋白电泳上样缓冲液

做 WB 要了解的有关 SDS-PAGE 的基本知识

今日跟大家分享关于 WB 实验的要点及背后的原理。开场时，先 bia 个概念～蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即 Western Blot：它是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置、深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。虽然此定义言简意赅，但总觉其好生硬费解，而对于得花近 2 天时间才能搞定的实验，我们如果没有较充分地理解它，就会很容易出现各种各样的 bug，最后结果也呵呵，对此自己确实深有体会。总的来说，WB 分很多种，比如 SDS

WB 样品粘稠像「鼻涕」怎么办？

。 3. 推荐优选柱式法进行蛋白样品提取 解决蛋白样品粘稠的最佳方式是改变蛋白质的制备方式，可以选择新一代柱式蛋白提取法替代传统的裂解液法。柱式法通过使用优化的裂解液配方，可有效提高裂解液对样品的裂解效率，特别是可以提升难溶蛋白的溶解效率。同时配合使用离心管柱技术有效阻截核酸，让蛋白溶液瞬间澄清无粘稠物产生，无需复杂操作，即可获得高质量无丢失的蛋白样品。 测试实例：裂解液法 VS 柱式法 同种样品分别使用裂解液法和柱式法进行 WB 样品制备，SDS-PAGE 电泳后考染如图

WB的疑问

wx275411643 麻烦哪位高手帮助解答一下我现在做WB遇到的情况，我买的抗体说明书上写的目的条带分子量和实际曝光出来的不一样，Marker肯定没问题了，是国内公司的抗体，问过公司，他们说是蛋白被修饰了，所以会大点。我做的结果比说明书上的大了大概10KD（书上说39KD），不知道公司的解释能不能接受？抗体是多克隆的。就怕他们用别的抗体冒充我要的。 zhe992000 看看你的蛋白质的分子量有没有问题？好多时候，蛋白在翻译