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- 2025年07月17日
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6-12months
- 英文名：
Recombinant Bone MoKLogenetic Protein 4 (BMP4)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg
www.shklbio.com
1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验and mitophagy in lung fibroblasts 的研究论文。 该研究表明，骨形态发生蛋白 4 (BMP4) 在 人肺中的下调，在 IPF 疾病发生和进展中起 关键作用，BMP4 信号通路通过调节肺成 纤维细胞的衰老和线粒体自噬抑制肺纤维 化。因此，BMP4 信号的激活可能是治疗 IPF 肺纤维化的一种新型有效的治疗方法。 血清型：AAV9 注射方式：气管内注射 病毒滴度：1x1010 vp/ml 靶向部位：肺 动物模型：C57BL/6 BMP4+/+ and BMP4+/- mice
细胞生长因子 2 (FGF-2) 、骨形态发生蛋白 4 (BMP4) 和血管内皮生长因子 A (VEGF-A) 的刺激下，内皮细胞在中胚层祖细胞中产生，并组成原始管状网络。 随后，在血管生成的过程中，原有的神经丛进行重塑，新的血管发芽和分支，直到一个成熟的循环网络形成【2】。 本篇文章基于 Nature protocol【3】 发表的文章，整理了人类多能干细胞 （hPSCs） 来源的血管类器官培养方案。 培养过程遵循发育原理，依靠上述生长因子进行诱导分化，最终培养成为血管类器官网络。 图1. hPSCs
学轨迹）仅使用 scanR 软件就可完成。 实验设置 用 50 ng/ml 的骨形态发生蛋白 4 (BMP4) 处理表达 FUCCI(CA) 探针的 H1 人类胚胎干细胞 (hESC)，以促进其向中内胚层谱系分化。 然后使用 10 X UPLANSAPO 物镜的 scanR 显微镜在 mCherry 和 YFP 通道中每隔 15 分钟对这些 H1 细胞进行一次成像，一共持续 6 天。 图 3. 在成像之初，先用 BMP4 刺激已经表达 FUCCI(CA) 探针的 hESC H1 细胞
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