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- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM014Bo01
- 2026年01月30日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Bone MoKLogenetic Protein 4 (BMP4)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验and mitophagy in lung fibroblasts 的研究论文。 该研究表明，骨形态发生蛋白 4 (BMP4) 在 人肺中的下调，在 IPF 疾病发生和进展中起 关键作用，BMP4 信号通路通过调节肺成 纤维细胞的衰老和线粒体自噬抑制肺纤维 化。因此，BMP4 信号的激活可能是治疗 IPF 肺纤维化的一种新型有效的治疗方法。 血清型：AAV9 注射方式：气管内注射 病毒滴度：1x1010 vp/ml 靶向部位：肺 动物模型：C57BL/6 BMP4+/+ and BMP4+/- mice
细胞生长因子 2 (FGF-2) 、骨形态发生蛋白 4 (BMP4) 和血管内皮生长因子 A (VEGF-A) 的刺激下，内皮细胞在中胚层祖细胞中产生，并组成原始管状网络。 随后，在血管生成的过程中，原有的神经丛进行重塑，新的血管发芽和分支，直到一个成熟的循环网络形成【2】。 本篇文章基于 Nature protocol【3】 发表的文章，整理了人类多能干细胞 （hPSCs） 来源的血管类器官培养方案。 培养过程遵循发育原理，依靠上述生长因子进行诱导分化，最终培养成为血管类器官网络。 图1. hPSCs
学轨迹）仅使用 scanR 软件就可完成。 实验设置 用 50 ng/ml 的骨形态发生蛋白 4 (BMP4) 处理表达 FUCCI(CA) 探针的 H1 人类胚胎干细胞 (hESC)，以促进其向中内胚层谱系分化。 然后使用 10 X UPLANSAPO 物镜的 scanR 显微镜在 mCherry 和 YFP 通道中每隔 15 分钟对这些 H1 细胞进行一次成像，一共持续 6 天。 图 3. 在成像之初，先用 BMP4 刺激已经表达 FUCCI(CA) 探针的 hESC H1 细胞
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