- ￥1280 - 3980
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- 2025年12月17日
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- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant Islet Cell Autoantigen 1 (ICA1)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg/50ug/100ug/1mg
| 规格： | 50ug/100ug/1mg | 产品价格： | ￥1280.0-￥3980.0 |
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| 规格： | 50ug/100ug/1mg | 产品价格： | ￥1280.0-￥3980.0 |
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1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验作者：聊城市第三人民检验科 宋春来 张维娜 胰岛素依赖型糖尿病（ IDDM ）是遗传易感染性个体通过自身抗原介导的免疫反应引起胰岛β细胞破坏的自身免疫性疾病。目前认为在临床明显的糖尿病发生以前， IDDM 经过一段长时间的糖尿病前期、如何在前期预测病糖尿病的发生，筛选 IDDM 的高危人群，及时进行免疫干预治疗是预防 IDDM 的关键，因而 IDDM 的生化检测指标显得尤为重要。 IDDM 的早期预防可分为三期：一期是有 IDDM 发病倾向高危
，细胞在微胶囊体系中可进行增殖，代谢等，细胞微胶囊典型结构见下图2。 在医学治疗研究中，研究人员通过包埋干细胞，哺乳细胞，动物细胞，用于细胞移植进行疾病的治疗。由于细胞在微胶囊体系中得到保护，进入宿主体系使不再容易受免疫系统影响，从而增加的疾病治疗的成功率。在重组蛋白质药物生产技术中，限制因素如蛋白质表达水平低, 蛋白质生化活性损失等和纯化过程困难等限制着该技术的应用，而通过微胶囊细胞技术，酶固定技术可以显著强化生物转化过程，从而提高重组蛋白质的生产并减少成本费用。S
研究。其中转基因鼠显示了自身抗原的不同表达方式和水平[15-17]。迄今为止这些模型的研究显示：只要所涉及的抗原表达的不是太高、太广，就能获得对这些自身抗原的免疫效果。 目前在对结肠直肠癌的临床接种实验中发现了三种自身抗原：P53、上皮细胞粘附颗粒（EP-CAM）和CEA[4]。其中EP-CAM和CEA可作为组织特异性抗原，其表达受正常上皮的限制。 在CEA转基因鼠和人的接种研究中发现，CEA仅对T细胞发生部分耐受，这种耐受可被特定的接种打破形成没有明显标志的自身免疫病[18,19]。 这种观点
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