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- KALANG/进口品牌
- 中国/美国
- KL511Mu01
- 2026年01月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant Interleukin 9 Receptor (IL9R)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg
www.shklbio.com
1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验，几种不同的α链(结合链)可以起用结构相同的信号转导链。以IL2R为例，这是由三条多肽链结合在一起的复合体，其中IL2R。链属低亲和力结合链，由两个Ig样结构域组成(因而属于下面要提到的免疫球蛋白受体家族)，胞内段很短，不能传递信号，需经诱导后才能表达在激活的T细胞表面。属于组成性表达的IL-2Rp和丁链为CkR―F成员，胞膜外区各有一个Ck结构域和FN3结构域。三链共同构成高亲和力的IL2R，由p链和丁链参与信号转导。IL-4R、IL7R、IL9R和IDl5R的丁链结构和功能相似。
吴佰霖 老板的一个课题，一个分泌性蛋白，可结合一些小分子，与膜上受体结合，但是用重组表达的蛋白与 pcDNA过表达这个蛋白的生物学效果不一样 请问有什么研究策略吗 freecell 你的研究材料？ 研究目的？ 吴佰霖 材料：细胞系，酵母表达重组蛋白，pcDNA表达克隆载体， 研究目的是分泌性蛋白结合受体后在胞内的信号通路，或相关作用分子
，建议选择 OD 值落在标曲范围中部的稀释倍数为最佳稀释倍数。 2 回收率 评估试剂盒测量结果趋于真实值程度的指标。一般添加标准品（重组蛋白）到天然样本基质内，进行测定。通常，线性及回收率的范围在 80%-120% 比较合适。 3 天然样本检测 确保试剂盒可以检测天然样本及合适的样本类型。可根据靶蛋白性质对天然样本进行选择，例如：血清、血浆、细胞上清、尿液、唾液和乳汁等。 4 交叉反应 通过交叉反应评估试剂盒的特异性。交叉反应越小，说明试剂盒的特异性越好。 ✔与同家族其他蛋白或结构类似物的交叉
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