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- KALANG/进口品牌
- 中国/美国
- KL831Ra02
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6-12months
- 英文名：
Recombinant Hedgehog Homolog, Sonic (SHH)
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
50ug/100ug/1mg
www.shklbio.com
1.基因扩增
（1）引物合成
搜索目标蛋白基因信息，结合蛋白的结构信息，选取片段或全长设计引物。注意避开跨膜区，以及复杂的二级结构，优选N端或C端，引物评分尽可能高，并搜索出核酸序列的酶切位点，使用载体等信息。经研发部根据研发经验提出修改意见最终定稿后交由第三方公司进行引物合成。
（2）基因克隆机重组鉴定
1）PCR
根据目的蛋白特异性表达组织，选取特异组织RNA用上述引物进行PCR扩增。进行琼脂糖凝胶电泳后，根据分子量大小选取目标片段进行切胶回收。再次PCR扩增，获得大量DNA，并进行PCR产物回收。
2）酶切，连接
根据酶切位点，将目标PCR产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的DNA产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。并将具有相同酶切位点的载体与DNA片段进行连接
3）转化，挑菌验证
将连接好的目的片段转化感受态E.coli,并在LB平板上进行过夜培养。挑取平板上的菌斑进行验证PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应菌液进行测序，测序正确后留种保存。
2.蛋白表达
（1）蛋白表达小试
挑取少量菌种进行培养，并诱导表达，将表达的蛋白进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达，小试表达成功后将进行蛋白预放大实验
（2）蛋白放大实验
将小试表达成功的蛋白菌株用400-800 ml培养基进行培养表达，进行SDS-PAGE，根据目标条带大小判断目标蛋白是否表达成功，预放大实验成功后将进行进一步的蛋白放大实验，放大实验使用800-1600 ml培养基进行培养，具体验证同上。
3.蛋白纯化
由于载体中包含了his标签，故采用镍柱进行纯化。有些蛋白可能会形成包涵体，在之前的一篇专题中我们有详细介绍过大肠杆菌重组蛋白纯化方法,纯化后的蛋白会进行SDS-PAGE， BCA等实验分子量以及纯度进行验证，纯度超过95%。
4. 质量检测
获得蛋白后会进行冻干，冻干之后会进行常规蛋白实验进行验证，合格后保存。
重组蛋白的制备主要是依据以上原理及步骤。以上是以原核表达举例。在制备过程中每一个环节都至关重要，不同的蛋白会在不同的环节出现技术难点，包括目的基因的扩增，包涵体的形成都会对重组蛋白的研发造成困境。但Cloud Clone Corp. 具有多年研发经验，还可提供真核表达系统，哺乳动物细胞表达系统，用户可根据需要选择，同时对蛋白有特殊要求我们也可提供私人定制。
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文献和实验人音猬因子(Shh) 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，细胞上清及相关液体样本中音猬因子(Shh)含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 人音猬因子(Shh) 水平。用纯化的 人音猬因子(Shh) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 音猬因子(Shh), 再与 HRP 标记的音猬因子 (Shh) 抗体
三句话读懂一篇 CNS，寒冷不仅让人起鸡皮疙瘩还生发；尘螨过敏？这里面的机制是这样的...
又是一个愉快的周末即将结束，小编特地为大家推荐分享多篇顶级期刊研究，持续关注我们的「三句话」栏目，开阔视野，文章赶超「小学生」不是梦！ 1，冷冻生发 —— 让人产生「鸡皮疙瘩」的细胞类型竟然还能调控毛囊干细胞「鸡皮疙瘩」真名立毛反应（piloerection），主要由毛囊、竖毛肌（APM）、交感神经的协调反应产生，涉及了上皮细胞、间充质细胞和神经细胞的交互作用。7 月 16 日发表在 Cell 的文章发现，毛囊通过毛囊干细胞（HFSC）分泌音猬因子（Sonic Hedgehog, SHH）指导
Cell 重磅，许雅捷团队报道：产生「鸡皮疙瘩」的机制，暗藏「生发」新方法
环境下的小鼠 HFSCs 提前进入生长期，从而产生新的毛发。这些数据表明，温度变化引发两种反应 —— 竖毛反应以调节温度，以及加速 HFSCs 活化以促进新毛发的产生。 图片来源：Cell 最后作者还探讨了这种三系单元在发育中是如何形成的。结果发现毛囊是该三系单元中最先形成的组织，正在发育的毛囊分泌的音猥因子（SHH）驱动了 APM 的发育，而交感神经仅在 APM 形成并成熟后才支配 HFSCs。（这里不得不感叹一下这篇 Cell 文章工作之细致详实） 图片来源：Cell 研究总结该研究发现交感
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