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- 技术资料
- 免疫原:
见说明书
- 亚型:
见说明书
- 形态:
粉末/液体
- 保存条件:
-20℃至 -80℃
- 克隆性:
Polyclonal
- 标记物:
未标记
- 适应物种:
General
- 宿主:
Rabbit,兔
- 应用范围:
WB, ICC, IHC-P, IHC-F, ELISA
- 浓度:
200ug/ml
- 靶点:
见说明书
- 抗体英文名:
Polyclonal Antibody to 25-Hydroxyvitamin D3 (HVD3)
- 抗体名:
25-羟基维生素D3(HVD3)多克隆抗体
- 规格:
100ug/200ug
www.klbscience.com
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
选择动物时应考虑抗原和免疫动物的种属差异,种系相近会影响免疫效果,一般要求动物适龄,健康,体重符合要求。常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。动物接受免疫的乳液量小鼠为1.0~2.0 ml, 家兔为2~4 ml。添加佐剂可帮助抗原在注射部位缓慢释放,增加免疫效果,常用佐剂为弗氏不完全佐剂。
初次免疫后要经过2~3次以上的加强免疫以形成较高水平的IgG抗体。初次免疫和再次免疫之间,小动物一般间隔10~14天,大动物间隔60天左右。在每次加强免疫后,进行抗血清效价测定,当效价达到理想状态时,便采集抗血清。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。也可采用尾巴或眼眶取血,静置待血液凝固成血块收缩析出血清,3000rpm离心15 min,取上清。这个过程要注意动物的养护,耗时长,但得率低,得到的血清还需进一步的纯化。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
由于多克隆抗体具有成本低、制备周期短且制备步骤相对简单、可识别多个表位等优点,在科研领域应用非常广泛。以上就是关于多克隆抗体制备的一个基本流程。供大家参考。
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文献和实验【实验 目的 】 ⒈ 加深对抗体基本知识的了解。 ⒉ 了解多克隆抗体的制备及纯化的基本方法。 ⒊ 了解免疫电泳的基本过程和实验依据。 一、多克隆抗体的制备 【实验 原理 】 当将抗原注射入实验动物体内时,一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合,受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体,这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体
一、器材 剪刀(剪兔毛用)一把、弯头眼科手术镊子(游离血管用)一把、直头眼科手术剪(剪血管用)一把,手术刀架,手术刀片,注射器(1ml、10ml,25ml)附针头,兔子固定架,灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿(直径18cm)、弯头止血钳四把,直头止血钳两把,手术缝合线,塑料放血管,纱布等。 二、试剂 生理盐水(或PBS) 弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant, FCA) Sigma F-5881 弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete
该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。 一、材料和试剂 1. 正辛酸。 2. 60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液,PBS。 3. 透析袋。 4. 高速低温离心机。 二、操作步骤 1. 将待提取样品用60mmol/L,pH4.0醋酸缓冲液稀释3~4倍,调pH至4.5,对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质。 2. 在室温下边搅拌边缓慢加入正辛酸,按每ml样品中加25μl,若样品体积
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