SYBR Green I,一种灵敏度非常高的dsDNA荧光染料,常用于核酸琼脂糖凝胶/聚丙烯-酰胺凝胶电泳。SYBR Green I染料的最大激发波长为497 nm,但是在~290 nm和~380 nm处有二级激发峰。与DNA结合的SYBR Green I染料的荧光发射集中在520 nm。因此,该染料可适用于多种凝胶检测仪。 本品是溶于DMSO的SYBR Green I 10,000×染液。 产品信息
1)电泳后DNA染色 a. 在琼脂糖或非变性聚丙烯-酰胺凝胶上进行电泳。 *TBE和TAE缓冲液均适合于SYBR Green I染料。 b. 用TE、TAE或TBE将SYBR Green I进行10,000倍稀释。 ① SYBR Green I染色对pH敏感,为获得最佳的灵敏度,应确认在染色温度下染色液的pH值在7.5-8.0之间(pH8.0更佳)。 ② 用水配制的染色液不如用缓冲液配制的稳定,为得到较好灵敏度,必须在24 h内使用。 c. 染液要充分覆盖凝胶,室温轻摇孵育10-40 min。 ① 推荐用塑料而不是玻璃容器来储存染色液,因为染料会吸附到玻璃表面。 ② 染色过程避光进行,建议在容器上加盖铝箔或置于暗处。 ③ 凝胶厚度及琼脂糖或聚丙烯-酰胺的比例不同,染色时间将有所不同。 ④ 无需脱色。 ⑤ 染液可置暗处(最好是冷藏)放置至少1周,重复使用最多4次。 2)电泳前DNA染色 a. 一般选择配制成SYBR Green I预制凝胶来实验。 临灌胶前将SYBR Green I储存液按照1:10,000倍稀释到凝胶溶液中,预制成含有SYBR Green I染料的琼脂糖或非变性聚丙烯-酰胺凝胶。预制的SYBR Green I凝胶的DNA检测下限(大约为30-40 pg/条带),略高于电泳后染色(<20 pg/条带)。此外,在SYBR Green I凝胶中的DNA片段迁移率明显比无染料凝胶中的相同片段慢。 b. 作为DNA模板预染标记。 一般而言,DNA在电泳前与染料工作液至少孵育15 min。
凝胶成像(紫外或蓝光透射仪或紫外顶置光源直射)
可在紫外或蓝光光源下轻松观察到用SYBR Green I染色的DNA。
从双链DNA中去除SYBR Green I
将SYBR Green I染色的DNA移至100 mM NaCl中,加入2.5倍体积的无水或95%的乙醇。在冰上孵育约20 min,在4℃离心至少10 min。去除乙醇,并用70%乙醇洗涤沉淀。让乙醇挥发,用TE重悬双链DNA即可。 注意事项
独立实验室进行的艾姆斯试验表明SYBR Green I 的致突变性明显比溴化乙锭要低得多,目前尚无关于SYBR Green I 染料对人体的致突变性或毒性的数据,但我们必须提醒用户注意,该染料能与DNA结合,因此,它应当被看作潜在诱变剂,在使用前小心谨慎。另外,在处理DMSO储存液时应特别小心,因为DMSO能促进有机分子进入组织。染料的处理应当符合当地的规定。
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