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- 2026年01月04日
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- 服务名称：
蛋白质检测技术服务
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上海达为科生物科技有限公司
一、技术原理与核心机制
CO-IP通过抗体与目标蛋白（诱饵蛋白）的特异性结合，在非变性条件下捕获其天然状态下相互作用的蛋白质（猎物蛋白），从而揭示生理或病理条件下的蛋白复合体组成。
- 分子基础：
- 抗原-抗体结合：抗体（如单抗、多抗）通过Fab段识别诱饵蛋白表位。
- 亲和力富集：Protein A/G磁珠结合抗体Fc段，通过离心或磁力分离复合物。
- 保留天然状态：使用非离子型裂解液（如NP-40）保持蛋白质互作结构，避免强变性剂破坏复合体。
- 检测方法：Western Blot（WB）验证已知互作蛋白，质谱（MS）鉴定未知互作成员。
二、标准化实验流程与关键参数
1. 实验步骤（以经典流程为例）：
- 样本制备：
- 细胞处理：对数生长期细胞（如HCT116结肠癌细胞）以5×10⁵ cells/皿密度铺板，药物处理（如阿伏苯宗）16-24小时。
- 裂解：使用含蛋白酶抑制剂的NP-40缓冲液裂解细胞，离心（12,000×g，15分钟）取上清。
- 抗体孵育：
- 500 μg总蛋白与1:10稀释的抗体（如抗-HER2）4℃旋转孵育过夜。
- 阴性对照：平行使用同型IgG排除非特异性结合。
- 磁珠捕获：加入Protein A/G磁珠（如Dynabeads），4℃孵育1小时，磁力架分离复合物。
- 洗涤与洗脱：
- 用PBST洗涤3次（每次5分钟），去除未结合蛋白。
- 洗脱：95℃加热5分钟（含SDS上样缓冲液）释放蛋白。
- 检测分析：
- WB验证：SDS-PAGE分离后，转膜孵育二抗（如HRP标记），ECL显影。
- 质谱分析：洗脱蛋白经酶解后，LC-MS/MS鉴定互作蛋白。
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文献和实验某个实验间隙… 萌新：开题报告已提交，转眼 1 个月过去了，实验还是一头雾水，为啥我的 co-IP 拉不下来蛋白？ 奋斗中的师兄：我当初正好相反，拉下来的蛋白被抗体条带覆盖住了，换个抗体忒不好找，无奈换了个蛋白，还好挺顺利。 大师兄：蛋白吧，不但种类多，理化性质差异较大，关键它们又喜欢组队在细胞里干活，IP、co-IP 又是常用的手段，掌握好这个工具还是很重要的，总不能随随便便就换个蛋白。 那要怎么快速掌握这项实验，轻松搞定各种疑难杂症呢？ 我们依据三十多年的 IP/co-IP 实验经验，总结
紫叶竹韵 做IP，之后Western 分析，看到有两条带，在25和50KD左右，应该是抗体的两条带，但是我的目的蛋白也是52KD的，这该怎么区分呢。 woxingwosu 最好是选择与做IP不同来源的抗体来做（比如说IP用鼠的抗体，WB就用兔的抗体），这样就不会检测到抗体的两条带。 如果没有不同来源的抗体的话，就要做IP的时候尽量少放点抗体，跑胶跑得远一点，使得目的蛋白能够被看到，不过由于你的蛋白是在是太接近重链
一、原理： 免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法,基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵，将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育，促进免疫复合物的形成；随后加入能够与抗体Fc段结合的proreinA/G（预先结合固化在琼脂糖小珠上），形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物，纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白，应用Westernblot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。 与其它研究方法相比，免疫
