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- HX-207
- 2026年01月11日
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大量
- 组织来源：
乳腺
- 物种来源：
人
- 是否是肿瘤细胞：
是
收到复苏好的贴壁细胞的处理方法：
1. 先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；
2. 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢掉；
3. 将培养瓶置于 37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养 4-6 小时；
4. 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基；
5. 重新将培养瓶置于 37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养过夜
6. 第二天传代。
收到冻存细胞的处理方法：
1.37°C 水浴预热培养基；
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C 水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；
3.在超净台中加入5ml 培养基重悬细胞，1000rpm 离心5min；
4.弃上清，加入5ml 培养基重悬细胞后转入 T25培养瓶中，轻轻晃匀；
5.置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；
6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
细胞传代
1.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；
2.37°C 水浴预热培养基；
3.在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS 清洗细胞后，再加入1ml 胰酶消化细胞；
4.显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml 培养基终止消化；
5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；
6.将细胞移入离心管中，1000rpm 离心5min；
7.弃上清，加入15-20ml 的培养基重悬细胞后转入 T75培养瓶中或按适当比例传到 T25瓶中（确保细胞贴壁
后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×104cells/cm2(2.5×105cells/T-25瓶），混匀细胞悬液，确保均
匀分布；
8.将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养。
细胞冻存
1.37°C 水浴预热培养基；
2.消化细胞后给细胞计数:
1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区；
2)充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液
器取20ul 混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳；
3)显微镜下，数四个计数区的总细胞数，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色；
4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2；
这里10000是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm 即10-4cm3计数池内，1cm3=1ml，将
四个计数区的细胞数除以4取平均数，乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。
5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%。
注:细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。
3.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。
4.在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm 离心5min。
5.弃上清，用90%培养液+10%DMSO 的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为1-3×106/ml。
6.将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。
7.将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒，-20°C 放1-2h 后，-80°C 过夜，然后快速转移到液氮中。
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文献和实验Nature 深度剖析：管坤良与 Alj 组研究成果为何截然相反，Hippo 通路调控乳腺癌的两面性
活性或 YAP/TAZ 蛋白。 基于此，作者进一步发现，敲降 LATS1/2 增加了 MCF-7 等腔面型乳腺癌细胞中 ERα 的稳定性，使癌细胞耐受内分泌治疗药物氟维司群（Fulvestrant, 可诱导 ERα 降解），但不影响 ERα 拮抗剂他莫昔芬（Tamoxifen）的疗效。 但出乎预料的是，2021 年 3 月 3 日，Hippo 领域大牛，来自美国加州大学圣地亚哥分校的管坤良课题组于 Nature 以 Matters arising 的形式发表题为 Hippo signalling
移动到花粉管中以后分裂的二核性花粉及在花粉粒内再行分裂形成的二个三核性花粉，后者在花粉管中就不再分裂了。裸子植物的小孢子在第一次分裂时形成小形的原叶细胞和大形细胞，大形细胞分裂形成生殖细胞和花粉管细胞，生殖细胞进一步分裂为柄细胞和中央细胞，中央细胞再一分为二，形成精细胞，在银杏（ Ginkgo）等则产生运动性的精子。原叶细胞数目可因植物种类不同而有许多差异，但它不久即行退化；此外，在紫杉科（ Tax-aceae）并不形成原叶细胞。 花粉的大小和形状各不相同，通常大小为 25— 100微米
Genome-wide Screen for miRNA Targets Using the MISSION Target ID Library
responses in most cell types. Therefore, a kill curve analysis must be performed to establish the minimum lethal dose. A. Plate 1.6 x 104 cells into wells of a 96-well plate in 120 μl of media. B. The next day add zeocin
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