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- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海
- 10321ES
- 2025年10月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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-20℃
- 保质期：
有效期18个月
- 英文名：
Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP)
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
1000U(10321ES80)
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶 | 10321ES80 | 1000U | -20℃ | 936.00 |
Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团，因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。
本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 规格 |
| 20427-A | Alkaline Phosphatase (30 U/μl) | 1000U |
| 20427-B | 10×AP buffer | 1ml |
| 来源（Source） | 携带小牛肠碱性磷酸酶表达质粒的酵母 |
| 质量控制（Quality Control） | 无核酸外切酶、核酸内切酶、核糖核酸酶污染 |
| 热灭活（Thermal Inactivation） | 在螯合剂存在下，65℃加热30min，99%活性不可逆丧失；使用苯酚，可使酶完全失活。 |
| 储存液条件（Storage conditions） | 10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol. |
| 活性定义（Unit definition） | 在pH9.8, 37℃条件下，以p-nitrophenylphosphate为底物，1分钟生成1µmolp-nitrophenol所用的碱性磷酸酶量定义为1个活力单位。 |
| 最佳pH（Optimal pH） | 该酶在底物浓度高的情况下其最佳反应pH为10，在底物浓度低时，最佳pH为8，此时该酶活性较高浓度底物时稍低。 |
| 优化体系（Optimal Buffer） | AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2) |
干冰运输。-20℃保存，本酶在保存条件下及其稳定。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml离心管中加入下列试剂：
| 无菌ddH2O | Up to 50µl |
| DNA 片段* | 1-20pmol |
| Alkaline Phosphatase | 1-2µl |
| 10×AP buffer | 5µl |
② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。
2 酚氯,仿法抽提DNA
① 苯酚/氯,仿/isoamyl alcohol
（25:24:1）抽提2次。
【注】：推荐在酚提取前将其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以彻底灭活碱性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，灭活效果更佳。
② 氯,仿/isoamyl alcohol
（24:1）抽提。
3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5µl 3M NaCl(终浓度150mM).
② 加入125µl（2.5倍体积）预冷乙醇，混匀后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。
4 溶解DNA
离心，彻底去除乙醇后，将DNA溶于适量去离子水（＜20µl）。
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| 产品名称 |
货号 |
规格 |
| 10322ES72 |
250 U |
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| Exonuclease I (E. coli) I型核酸外切酶 |
10320ES81/93 |
1500 U/15000 U |
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文献和实验1 溶解核酸酶P1（sigma)的冷冻干燥物与1.0ml30mM醋酸缓冲液（PH=5.3）？不知道此配法行不行？在sigma的说明书上没有具体说明！ 酶活性:1mg核酸酶P1在1小时，ph5.3 ,T=50 能够把2gRNA或0.2gDNA酶解为5-单核甘酸 促进此酶的稳定性：在孵育时，可加zn和人血清白蛋白增加其稳定性！ 2牛小肠碱性磷酸酶 试剂准备 • 10mM Tris-HCl (pH 8.0) • CIAP stop buffer 10mM Tris-HCl (pH
识别的特定DNA序列不同的碱基序列，这种现象叫限制酶的star活性。它的出现与限制酶、底物DNA以及反应条件有关。 (2)碱性磷酸酶 细菌碱性磷酸酶(BAP)和牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)都能催化水解DNA、RNA、dNTP和NTP上的5’-磷酸残基。比较而言，CIAP更常用，因其可在70℃ 10’内加热灭活或通过苯酚抽提而变性失活，同时CIAP的活性比BAP的高10-20倍。它主要用于：(1)克隆时去除载体的5’-P，以防载体自连;(2)在用 Kinase进行
条件有关。 （2）碱性磷酸酶 细菌碱性磷酸酶（BAP）和牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）都能催化水解DNA、RNA、dNTP和NTP上的5’－磷酸残基。比较而言，CIAP更常用，因其可在70℃ 10’内加热灭活或通过苯酚抽提而变性失活，同时CIAP的活性比BAP的高10－20倍。它主要用于：（1）克隆时去除载体的5’-P，以防载体自连；（2）在用 Kinase进行5’末端标记前，去除DNA的5’-P。 （3）连接酶 体外催化磷酸二酯键的形成可使用两种酶：大肠杆菌连接酶和T4噬菌体连接
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