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文献和实验wangch84 各位高手，兄弟最近忙于质粒构建，意图将一段长约4000 bp的片段，通过BamH1和EcoR1两个酶切位点连接到pcDNA3.1+载体上。情况如下： 1. 通过LA Taq酶扩增，并纯化回收目的片段（引物中带有酶切位点，保护性碱基＝3，上游带有Kozak序列）；由于回收效率很高，所以在进行下一步双酶切时只加了12 μl的目的片段，H2O 20 μl，10 X K BUFFER 4 μl，两种酶各2 μl，37℃作用过夜（12-14 h
【求助】MDCK转染与免疫荧光问题，解决问题追加丁当，谢谢！
wen-wen 实验组：将带有c-myc和UT-B的pcDNA3.0质粒转染到MDCK细胞当中 对照组：1、将带有c-Myc和AQP1的pcDNA3.0质粒转染到MDCK细胞； 2、将GFP的质粒（就是一个只有GFP的质粒，没有UT-B,AQP1）转染MDCK细胞中，主要目的是想看我的操作技术怎么样； 3、过表达AQP1-MDCK的稳转细胞系。 然后通过免疫荧光来证实转染结果。（因为质粒若带有GFP会影响
zhangyuxianggx 各位大侠好！现有pcDNA3-mCherry和pGEM-hgene两个东西在滤纸上，老师就说让构建载体，具体是什么意思啊？我理解的是一个真核表达载体和构建好的pGEM质粒，但是不知下一步该怎么做？恳请各位好心的大侠指点一二。 shylook 直接插入cDNA吧 zhangyuxianggx 那个pGEM就是已经插入了DNA的载体。请问这两个东西溶下来以后
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