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- keygen
- KGS130
- 2025年11月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
105 pmol
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文献和实验改善EMSA的电泳结果。如需纯化，可以按照如 下步骤操作：（1） 对于100微升标记好的探针，加入1/4体积即25微升的5M醋酸铵，再加入2体积即200微升的无水乙醇，混匀。（2） 在-70℃至-80℃沉淀1小时，或在-20℃沉淀过夜。（3） 在4℃，12, 000g-16, 000g离心30分钟。小心去除上清，切不可触及沉。（4） 在4℃，12, 000g-16, 000g离心1分钟。小心吸去残余液体。微晾干沉淀，但不宜过分干燥。（5） 加入100微升TE，完全溶解沉淀。标记好的探针最好立即使用
的能力,如果结合了那才是真正的参与转录的转炉银子, 有的入核后却不能和DNA结合,只能等着被降解! 其实总体而言大家做试验时都希望成功,但是EMSA试验技术的独特性和复杂性决定了,要想做成功EMSA试验,拿到阳性结果可总结为一句话: 把握整体,注意细节! 我觉的EMSA的整体性包括6大点:探针制备(设计,合成,标记,纯化,退火);个人实验设计(时间剃度浓度查阅文献等);核蛋白制备;浓度测定;EMSA操作;实验时竞争设计. 这六大点都是会直接影响到EMSA试验的成功
/蛋白复合物的电泳带明显减少。 2、为什么实验背景高？ 1）曝光或者成像时间过长。 2）封闭时间不足或者效率不高。 3）洗涤效果不佳。 4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。 3、EMSA测定需要多少量的蛋白与标记的探针？ 对每一个特定的结合蛋白和探针，所用的纯化蛋白，部分纯化蛋白，粗制核抽提液需作优化：一般所用纯化蛋白的量在20-2000ng间，可将蛋白:DNA的等摩尔比调整为蛋白的摩尔数是DNA的5倍；用粗制核抽提液，需要2-10ug蛋白形成特异的复合物。 部分
