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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
4℃保存一年;-20℃长期保存
- 库存:
10
- 供应商:
乔羽生物
- 规格:
瓶
编号:QY-mv0143
细胞名称:NCI-H358人非小细胞肺癌细胞
规格:瓶
用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗.
NCI-H358人非小细胞肺癌细胞报价细胞相关操作:
细胞复苏
1.37°C水浴预热培养基(DMEM+10% FBS);
2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续暖细胞);
3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;
4.弃上清,加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中,轻轻晃匀;
5.置于37°C,5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话,瓶盖不要拧太紧);
6.第二天,用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。
细胞传代
1.当细胞融合度达到90%以上时,给细胞传代;
2.37°C水浴预热培养基(DMEM+10% FBS);
3.在超净台中,弃培养基,加入2-5mlPBS清洗细胞后,再加入1ml胰酶消化细胞;
4.显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时,加入5ml培养基(DMEM+10% FBS)终止消化;
5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散;
6.将细胞移入离心管中,1000rpm离心5min;
7.弃上清,加入15-20ml的培养基(含血清)重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中(确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间),细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混匀细胞悬液,确保细胞均匀分布;
8.将培养瓶置于37°C,5% CO2的无菌培养箱中培养。
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文献和实验NCI-H526来源于一名55岁白人男性小细胞肺癌(Stage E)患者的骨转移灶,从肺部分离获得。该细胞高表达两个小细胞肺癌生化标志物——神经元特异性烯醇化酶和脑肌酸激酶同工酶,是肺癌研究中常用的体外模型之一。 形态特征与生长方式 悬浮生长,细胞以大量聚团形式存在。刚复苏时细胞是分散的,24-48小时后状态逐渐恢复,开始聚团生长。传代时不需要完全吹散成单细胞,把大团吹成小团即可,避免团块中间的细胞缺乏营养。 培养要点与注意事项 培养基选用1640添加10%胎牛血清及1%双抗
都是贴壁细胞,在消化传代过程中,步骤如下:倒尽旧的培养液->用无血清的培养基清洗一两次->加入一定量的胰酶,置于37度培养箱中5--10分钟,使细胞悬浮->显微镜下观察,待细胞大部分变圆时,回到超静台->加入一定量的含血清的新培养液,以终止胰酶作用->反复吹打细胞->再置显微镜下观察,直到细胞全部悬浮起来->吸出一部分加入新的培养瓶中->最后再补充加入一定量新的培养液。注意: 1、吹细胞时尽量多吹边角儿,此处细胞生长的多。2、吸出细胞前要混匀,可以剧烈震荡培养瓶。3、我们用的是DMEM
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