新型钙离子荧光探针Calbryte520, AM *细胞渗透

产品优势  

Calbryte™ 520 AM是一种具有卓越亮度与光稳定性的绿色荧光钙离子指示剂，能够灵敏检测活细胞中的钙离子通量，适用于GPCR筛选及钙信号传导研究。

高品质试剂：严格遵循最高生产标准，确保实验结果稳定可靠

卓越性能：经多种实验条件验证具有可靠效能

广泛应用：适用于各类研究及诊断检测场景

低背景荧光：与Ca²⁺结合后显著增强荧光信号，能有效降低背景干扰，提高检测灵敏度。

细胞膜通透性： 疏水性AM酯可被动穿透细胞膜，被胞内酯酶水解后形成带负电荷的荧光染料，实现简单负载

适用范围

用于钙离子检测

产品介绍

钙离子检测在生命科学研究中具有关键作用。基于荧光探针与钙离子结合的光谱响应特性，研究人员可通过荧光显微镜、流式细胞仪、荧光光谱和荧光酶标仪等技术精确监测细胞内游离钙离子浓度的动态变化。自1989年Fluo-3问世以来，后续开发的Fluo-4、Fluo-8和Cal-520系列探针虽提升了信背比，其仍存在显著局限：最突出的问题在于使用Fluo-4 AM进行细胞内钙检测时需添加丙磺舒以阻止染料外漏——这一限制与其前代产品Fluo-3相同。对丙磺舒的依赖会影响检测可靠性，因为该试剂已知会对细胞产生复杂的干扰效应，可能导致结果偏差

Calbryte™ 520 AM正是针对这些挑战而研发的新一代解决方案。这种新型细胞渗透性钙离子指示剂以无荧光、非活性形式进入细胞后，经细胞内酯酶水解AM酯基激活，转化为具有钙响应能力的极性分子。水解产物因无法跨膜而高效滞留于细胞内，彻底消除了对丙磺舒的需求。当与钙离子结合时，Calbryte™ 520能产生亮度极高且信噪比卓越的荧光信号。值得注意的是，该指示剂与Fluo-4具有完全相同的激发和发射波长，可直接兼容现有Fluo-4检测方案。凭借其增强的信号质量、改进的细胞内滞留能力以及无需丙磺舒的操作优势，Calbryte™ 520 AM已成为评估GPCR与钙离子通道靶点、筛选活细胞内相关激动剂与拮抗剂时最可靠的钙离子指示剂。

实验示例

储备溶液的配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应在配制后分装为单次使用量，并保存于-20°C。避免反复冻融。

Calbryte520, AM 储备溶液

使用高质量无水DMSO配制2-5 mM的Calbryte520, AM储备液。

注意：Calbryte520, AM溶于DMSO后为无色透明溶液。

工作溶液配制 

Calbryte520, AM 工作溶液

实验当天，将Calbryte520, AM溶解于DMSO或将储备液 aliquot 解冻至室温。

在所选缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中加入0.04% Pluronic® F-127，配制2-20 µM的Calbryte520, AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4-5 μM。具体染料加载浓度需根据实验条件优化。

注意：1.非离子型表面活性剂Pluronic® F-127可增强Calbryte520, AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

          2.若细胞存在有机阴离子转运体，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（孔板终浓度0.5-1 mM）以减少水解后染料的泄漏。百萤生物提供多种ReadiUse™丙磺舒产品（包括水溶型、钠盐及稳定化溶液）。

实验操作流程

以下为活细胞加载AM酯的推荐方案，请根据实际需求调整。

1.将细胞于生长培养基中孵育过夜。

2.次日向细胞板中加入1X Calbryte520, AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，加载前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加载染料的细胞板置于37°C培养箱孵育1-2小时。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液以清除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备FITC滤光片的荧光显微镜或者具备程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 490/525 nm，截止波长515 nm检测荧光信号