Hoechst 33258染色液使用说明: 1. 对于固定的细胞或组织: a. 对于细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧光染色,染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色,则直接进行后续的Hoechst 33258染色。 b. 对于贴壁细胞或组织切片,加入少量Hoechst 33258染色液,覆盖住样品即可。对于悬浮细胞,至少加入待染色样品体积3倍的染色液,混匀。室温放置3-5分钟。 c. 吸除Hoechst 33258染色液,用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。 d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。 2. 对于活细胞或组织: a. 加入适当量Hoechst 33258染色液,必须充分覆盖住待染色的样品,通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液,对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。 b. 在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液,用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。