Hieff™ Taq Plus DNA Polymeras

Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶产品描述

HieffTM Taq Plus DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性 (校对活性)的蛋白组成的混合酶。其保真性是Taq DNA Polymerase的5倍，且具有更强的扩增性能。一般情况下，使用HieffTM Taq Plus DNA Polymerase可以得到更高的扩增产量。有些Taq DNA Polymerase不能扩增的片段，HieffTM Taq Plus DNA Polymerase可以正常扩增。PCR产物的3’端带A，可克隆至T载体。产品中提供的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。
Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶产品信息



组 分

产品编号/规格

10104ES72(250U)

10104ES82(5×250U)

10 × Taq Plus Buffer (with 15 mM MgCl2)

5×1mL

5×1.25 ml
25 mM MgCl2

1 mL

5×1mL

dNTP Mix (10 mM each)

200 μl

5×200 μl

HieffTM Taq Plus DNA Polymerase (5 U/μl)

50 μl

5×50 μl

5 × PCR Enhancer

500 μl

5×500 μl

10 × Loading buffer

1.25 ml

5×1.25 ml

活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位 (U)。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg λ-Hind III在74℃下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA残留检测：50 μl体系中，加入2 U本酶，以ddH2O为模板，扩增E. coli 16 s rDNA基因。35个循环后进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl PCR体系中加入1.25 U本酶，以20 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin gene。30个循环后将1/10PCR产物进行1 %琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的1 kb条带。



应用实例

1. 反应体系配制：

ddH2O

Up to 50 μl

10×Taq Plus Buffer(with 15 mM MgCl2)

5 μl

25 mM MgCl2a

optional

dNTP Mix(10 mM each)

1 μl

5×PCR Enhancerb

optional

模板DNAc

optional

引物1(10 μM)

2 μl

引物2(10 μM)

2 μl

HieffTM Taq DNA Polymerase(5 U/μl)

0.25-0.4 μl



a对于大多数PCR反应，Mg2+最佳终浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为1.5 mM的Mg2+，如有需要，可用25 mM MgCl2以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg2+最佳使用浓度。

b推荐仅当扩增片段GC含量> 60%且优化条件也无法正常扩增时使用；可能会降低保真度。

c不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

人基因组DNA

0.1～1 μg

大肠杆菌基因组DNA

10～100 ng

λDNA

0.5～5 ng

质粒DNA

0.1～10 ng

1. PCR反应条件设置：
94℃

5 min(预变性)

94℃

30 sec



35循环

55℃*

30 sec

72℃

30 sec/kb

72℃

7 min（彻底延伸）

*退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。

Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶 注意事项

1. 操作注意事项
由于Taq Plus DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性，建议在冰上配制PCR反应体系，再置于PCR仪上进行扩增。这样可以减少非特异扩增，有利于提高扩增的特异性，得到良好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶yb1145 HS 人滑膜细胞 Human Synoviocytes 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1146 HNPC 人髓核细胞 Human Nucleus Pulposus Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1147 HAPC 人脊髓纤维环细胞 Human Anulus Pulposus Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1148 ATCC
yb1149 肝细胞系统 ATCC
yb1150 HHSEC 人肝窦内皮细胞 Human Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1151 HIBEpiC 人肝内胆管上皮细胞 Human Intrahepatic Biliary Epithelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1152 HH 人肝细胞 Human Hepatocytes 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1153 HH 人肝细胞 Human Hepatocytes 2 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1154 HHSteC 人肝星形细胞 Human Hepatic Stellate Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1155 ATCC
yb1156 胆囊细胞系统 ATCC
yb1157 HGBF 人胆囊成纤维细胞 Human Gallbladder Fibroblasts 5 x 10^5 cells per 1ml ATCC
yb1158 脾细胞系统 ATCC
yb1159 HSEC 人脾血管内皮细胞 Human Splenic Endothelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1160 HSF 人脾成纤维细胞 Human Splenic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1161 ATCC
yb1162 心脏细胞系统 ATCC
yb1163 HCMEC 人心脏微血管内皮细胞 Human Cardiac Microvascular Endothelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1164 HCAEC 人冠状动脉内皮细胞 Human Coronary Artery Endothelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1165 HAEC 人主动脉内皮细胞 Human Aortic Endothelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1166 HASMC 人主动脉平滑肌细胞 Human Aortic Smooth Muscle Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1167 HAF 人主动脉成纤维细胞 Human Aortic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1168 HCM 人心肌细胞 Human Cardiac Myocytes 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1169 HCM-a 人心肌细胞--成人 Human Cardiac Myocytes-adult 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1170 HCF 人心脏成纤维细胞 Human Cardiac Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1171 HCF-av 人心脏成纤维细胞--成人心室 Human Cardiac Fibroblasts-adult ventrical 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1172 HCF-aa 人心脏成纤维细胞--成人心房 Human Cardiac Fibroblasts-adult atrial 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1173 HCF-a 人心脏成纤维细胞--成人 Human Cardiac Fibroblasts-adult 5 x 10^5 cells/vial ATCC