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- YB10116ES03
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
密封干燥保存
- 保质期：
6个月
- 英文名：
2×Hieff™ HS Pfu Master Mix
- 库存：
1000
- 供应商：
钰博生物
2×Hieff™ HS Pfu Master Mix产品描述
2×HieffTM HS Pfu Master Mix是即用型的PCR预混合溶液，包含HieffTM HS Pfu DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。体系中含有的保护剂使得Master Mix 经过反复冻融后仍可维持稳定的活性。PCR产物为平末端。
2×Hieff™ HS Pfu Master Mix产品组分
编号
组分
产品编号/规格
10116ES03（1ml）
10116ES08（5×1ml）
10116-A
2×HieffTM Pfu Master Mix
1 ml
1 ml×5
10116-B
超纯水（PCR Grade）
1ml
1 ml×5
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。
应用实例
1. 反应体系配制：
ddH2O
Up to 50 μl
模板DNA§
optional
引物1(10 μM)
2 μl
引物2(10 μM)
2 μl
2×HieffTM HS Pfu Master Mix
25 μl
注：§ 针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50μl反应体系推荐模板使用量，仅供参考。
模板种类/扩增长度
＜1 kb
1 kb～10 kb
＞10 kb
基因组DNA
50 ng～250 ng
100 ng～300 ng
150 ng～400 ng
质粒或病毒DNA
10 pg～20 ng
10 pg～20 ng
1 ng～30 ng
cDNA
1～5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10)
2. 一般PCR反应条件设置：
循环步骤
温度
时间
预变性a
95℃
30 sec～3 min
变性b
95℃
5～10 sec
25～35循环
退火c
45℃～72℃
10～30 sec
延伸d
72℃
15～30 sec/kb
彻底延伸
72℃
5～10 min
注：a. 推荐大多数模板的预变性温度为95℃， 时间为：质粒或病毒DNA，30 sec，基因组2 min，cDNA 3 min；对于高GC含量模板，预变性温度需提升至98℃，变性时间为2～4 min；对于超过10 kb的扩增子，预变性温度需降低至92℃，变性时间不超过2 min。
b. 对于大多数模板在95℃变性时间设为5～10 sec即可。对于高GC含量模板，变性温度需提升至98℃；对于超过10 kb的扩增子，变性温度需降低至92℃，并延长变性时间至15 sec。
c. Pfu DNA Polymerase能够促进模板和引物高效退火。一般来说，退火温度设置为引物Tm值±3℃范围内之间即可。如果需要，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板结合的最适温度。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈现弥散状。因此，推荐退火时间设置为10 sec即可。对于一些困难模板，退火时间可在10～30 sec之间调整。
d. 对于大多数扩增反应，延伸过程可在72℃进行。对于超过10 kb的扩增片段，需降低延伸温度至68℃。延伸时间取决于扩增片段的长度和模板的复杂性。使用质粒等复杂程度较低的DNA做模板时，可使用15 sec/kb的延伸时间；使用基因组, cDNA等复杂程度较高的DNA做模板时，延伸时间应为30 sec/kb。太长的延伸时间会导致非特异性扩增增加，因此延伸时间请勿超过30 sec/kb。
3. 长片段PCR指南：
*使用高质量的模板；
*使用长引物。将引物加长至Tm值68～72℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性；
*推荐反应条件设置：
循环步骤
温度
时间
预变性
92℃
2 min
变性
92℃
5～10 sec
25～35循环
延伸
68℃
15～30 sec/kb
彻底延伸
68℃
5～10 min
4. 高GC含量模板PCR指南：
*使用高质量的模板；
*提高变性温度至98℃；
*推荐反应条件设置：
循环步骤
温度
时间
预变性
98℃
3 min
变性
98℃
10 sec
25～35循环
退火
45℃～72℃
10～30 sec
延伸
72℃
15～30 sec/kb
彻底延伸
72℃
5～10 min
2×Hieff™ HS Pfu Master Mix引物设计注意事项
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
2×Hieff™ HS Pfu Master Mixyb1042 HEM-m 人表皮黑色素细胞--中色素 Human Epidermal Melanocytes-medium 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1043 HEM-d 人表皮黑色素细胞--深色素 Human Epidermal Melanocytes-dark 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1044 HM 人黑色素细胞--成人 Human Melanocytes-adult 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1045 HEM-f 人黑色素细胞--胎儿 Human Epidermal Melanocytes-fetal 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1046 HDF-f 人真皮成纤维细胞--胎儿 Human Dermal Fibroblasts-fetal 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1047 HDF-n 人真皮成纤维细胞--新生 Human Dermal Fibroblasts-neonate 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1048 HDF-a 人真皮成纤维细胞--成人 Human Dermal Fibroblasts-adult 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1049 HDF-f-mt 人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理 Human Dermal Fibroblasts-Fetal-Mitomycin C treated 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1050 HDF-f-mt 人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理 Human Dermal Fibroblasts-Fetal-Mitomycin C treated 2 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1051 HDF-f-mt 人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理 Human Dermal Fibroblasts-Fetal-Mitomycin C treated 5 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1052 HDF-f-mt 人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理 Human Dermal Fibroblasts-Fetal-Mitomycin C treated 1 x 10^6 cells/vial x 5 ATCC
yb1053 ATCC
yb1054 毛发细胞系统 ATCC
yb1055 HHDPC 人毛乳头细胞 Human Hair Dermal Papilla Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1056 HHGMC 人生发基质细胞 Human Hair Germinal Matrix Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1057 HHORSC 人毛囊外根鞘细胞 Human Hair Follicular Outer Root Sheath Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1058 HHIRSC 人毛囊内根鞘细胞 Human Hair Follicular Inner Root Sheath Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1059 HHFK 人毛囊角质细胞 Human Hair Folliclar Keratinocytes 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1060 ATCC
yb1061 淋巴细胞系统 ATCC
yb1062 HLEC 人淋巴内皮细胞 Human Lymphatic Endothelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1063 HLF 人淋巴成纤维细胞 Human Lymphatic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
2×HieffTM HS Pfu Master Mix是即用型的PCR预混合溶液，包含HieffTM HS Pfu DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。体系中含有的保护剂使得Master Mix 经过反复冻融后仍可维持稳定的活性。PCR产物为平末端。
2×Hieff™ HS Pfu Master Mix产品组分
编号
组分
产品编号/规格
10116ES03（1ml）
10116ES08（5×1ml）
10116-A
2×HieffTM Pfu Master Mix
1 ml
1 ml×5
10116-B
超纯水（PCR Grade）
1ml
1 ml×5
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：以10 ng λDNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。
应用实例
1. 反应体系配制：
ddH2O
Up to 50 μl
模板DNA§
optional
引物1(10 μM)
2 μl
引物2(10 μM)
2 μl
2×HieffTM HS Pfu Master Mix
25 μl
注：§ 针对不同模板的最佳反应浓度有所不同，下表为50μl反应体系推荐模板使用量，仅供参考。
模板种类/扩增长度
＜1 kb
1 kb～10 kb
＞10 kb
基因组DNA
50 ng～250 ng
100 ng～300 ng
150 ng～400 ng
质粒或病毒DNA
10 pg～20 ng
10 pg～20 ng
1 ng～30 ng
cDNA
1～5 μl(不超过PCR反应总体积的1/10)
2. 一般PCR反应条件设置：
循环步骤
温度
时间
预变性a
95℃
30 sec～3 min
变性b
95℃
5～10 sec
25～35循环
退火c
45℃～72℃
10～30 sec
延伸d
72℃
15～30 sec/kb
彻底延伸
72℃
5～10 min
注：a. 推荐大多数模板的预变性温度为95℃， 时间为：质粒或病毒DNA，30 sec，基因组2 min，cDNA 3 min；对于高GC含量模板，预变性温度需提升至98℃，变性时间为2～4 min；对于超过10 kb的扩增子，预变性温度需降低至92℃，变性时间不超过2 min。
b. 对于大多数模板在95℃变性时间设为5～10 sec即可。对于高GC含量模板，变性温度需提升至98℃；对于超过10 kb的扩增子，变性温度需降低至92℃，并延长变性时间至15 sec。
c. Pfu DNA Polymerase能够促进模板和引物高效退火。一般来说，退火温度设置为引物Tm值±3℃范围内之间即可。如果需要，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板结合的最适温度。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈现弥散状。因此，推荐退火时间设置为10 sec即可。对于一些困难模板，退火时间可在10～30 sec之间调整。
d. 对于大多数扩增反应，延伸过程可在72℃进行。对于超过10 kb的扩增片段，需降低延伸温度至68℃。延伸时间取决于扩增片段的长度和模板的复杂性。使用质粒等复杂程度较低的DNA做模板时，可使用15 sec/kb的延伸时间；使用基因组, cDNA等复杂程度较高的DNA做模板时，延伸时间应为30 sec/kb。太长的延伸时间会导致非特异性扩增增加，因此延伸时间请勿超过30 sec/kb。
3. 长片段PCR指南：
*使用高质量的模板；
*使用长引物。将引物加长至Tm值68～72℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性；
*推荐反应条件设置：
循环步骤
温度
时间
预变性
92℃
2 min
变性
92℃
5～10 sec
25～35循环
延伸
68℃
15～30 sec/kb
彻底延伸
68℃
5～10 min
4. 高GC含量模板PCR指南：
*使用高质量的模板；
*提高变性温度至98℃；
*推荐反应条件设置：
循环步骤
温度
时间
预变性
98℃
3 min
变性
98℃
10 sec
25～35循环
退火
45℃～72℃
10～30 sec
延伸
72℃
15～30 sec/kb
彻底延伸
72℃
5～10 min
2×Hieff™ HS Pfu Master Mix引物设计注意事项
1）引物3’端最后一个碱基最好为G或者C；
2）引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
2×Hieff™ HS Pfu Master Mixyb1042 HEM-m 人表皮黑色素细胞--中色素 Human Epidermal Melanocytes-medium 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1043 HEM-d 人表皮黑色素细胞--深色素 Human Epidermal Melanocytes-dark 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1044 HM 人黑色素细胞--成人 Human Melanocytes-adult 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1045 HEM-f 人黑色素细胞--胎儿 Human Epidermal Melanocytes-fetal 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1046 HDF-f 人真皮成纤维细胞--胎儿 Human Dermal Fibroblasts-fetal 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1047 HDF-n 人真皮成纤维细胞--新生 Human Dermal Fibroblasts-neonate 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1048 HDF-a 人真皮成纤维细胞--成人 Human Dermal Fibroblasts-adult 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1049 HDF-f-mt 人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理 Human Dermal Fibroblasts-Fetal-Mitomycin C treated 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1050 HDF-f-mt 人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理 Human Dermal Fibroblasts-Fetal-Mitomycin C treated 2 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1051 HDF-f-mt 人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理 Human Dermal Fibroblasts-Fetal-Mitomycin C treated 5 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1052 HDF-f-mt 人真皮成纤维细胞-胎儿丝裂霉素C处理 Human Dermal Fibroblasts-Fetal-Mitomycin C treated 1 x 10^6 cells/vial x 5 ATCC
yb1053 ATCC
yb1054 毛发细胞系统 ATCC
yb1055 HHDPC 人毛乳头细胞 Human Hair Dermal Papilla Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1056 HHGMC 人生发基质细胞 Human Hair Germinal Matrix Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1057 HHORSC 人毛囊外根鞘细胞 Human Hair Follicular Outer Root Sheath Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1058 HHIRSC 人毛囊内根鞘细胞 Human Hair Follicular Inner Root Sheath Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1059 HHFK 人毛囊角质细胞 Human Hair Folliclar Keratinocytes 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1060 ATCC
yb1061 淋巴细胞系统 ATCC
yb1062 HLEC 人淋巴内皮细胞 Human Lymphatic Endothelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1063 HLF 人淋巴成纤维细胞 Human Lymphatic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
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