Protein A/G Agarose 蛋白A/G琼脂糖珠

Protein A/G Agarose 蛋白A/G琼脂糖珠产品描述

天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能相似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。然而两者结合特异性上有所不同（详细见附录1，蛋白A，G对不同物种Ig的结合能力总表），如蛋白G对人IgG3，大鼠IgG2a，绵羊IgG1具有很高的亲和力，但蛋白A对这些Ig结合力很弱。蛋白A，蛋白G常共价偶联在固体载体如琼脂糖珠或丙烯酸树脂小珠上，直接用以做免疫沉淀（IP）或者免疫共沉淀（Co-IP）来进行蛋白功能相关研究，或者直接装在层析柱上来纯化单克隆或者多克隆抗体。

本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。本品是同时共价偶联了蛋白A和蛋白G的琼脂糖珠，比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围，适合于所有蛋白A琼脂糖珠和蛋白G琼脂糖珠单独可以结合的Ig，实用性更高。本品为50%的悬液，1 ml Protein A/G 琼脂糖珠可结合约25 mg人IgG。

Protein A/G Agarose 蛋白A/G琼脂糖珠运输与保存方法

常温运输。

4℃保存，两年有效。

使用方法

1. 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）:

1）蛋白样品的准备：

① 贴壁细胞：取10 cm细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤两次，然后加入500 µl至2 ml细胞裂解液裂解细胞（如RIPA裂解液）；

② 悬浮细胞：离心收集细胞后，PBS洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解；

③ 组织样本：参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解；

注意：a）具体的裂解方法，应参考不同裂解液的详细使用方法；b）不同量的细胞，应选用适当裂解液的用量进行裂解（如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释，如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量）；c）可选：细胞或组织处理时加入广谱核酸酶Benzonase，能够降解所有形式的DNA和RNA(单链、双链、线形和环状)，而无蛋白水解活性。此步操作可以降低背景，保障实验的可重复性。

2）去除非特应性结合（可选）：

① 取0.2-1 ml 细胞或组织裂解液，蛋白量约为0.2-1 mg，加入约1 µg和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20 µl充分重悬的Protein A/G Agarose，4℃缓慢摇动30 min~2 h。

② 2500 rpm（约1000g）离心5min，取上清用于后续的免疫沉淀。

注意：所谓种属相同的IgG是指与后续免疫沉淀用一抗宿主相同的正常IgG。此步骤可以预先去除样本与Protein A/G Agarose的非特异性结合，降低背景。

3）免疫沉淀（IP）：

① 加入0.5-2 µg用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动过夜。

② 再加入10-20 µl充分重悬的Protein A/G Agarose，4℃缓慢摇动1~3 h。

注意：10-20 µl Protein A/G Agarose，即20-40 µl 50%充分重悬的Protein A/G Agarose slurry。

③ 2500 rpm（约1000 g）离心5min，或瞬时高速离心，小心吸除上清。

注意：宁可残留少量上清，也不要吸去Protein A+G Agarose。

④ 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次，裂解液或PBS的用量每次为0.5~1 ml。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上述步骤③。

⑤ 完成最后一次洗涤后，去除上清，加入20-50 µl 1×SDS-PAGE 电泳上样缓冲液，震荡重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。

⑥ 沸水浴处理3-5 min，取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳，暂时不用的样品可以-20℃保存。

2．免疫共沉淀 （Co-IP）

参考1 中免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但推荐用新鲜的蛋白样品为佳。另外，细胞或组织处理时推荐加入广谱核酸酶Benzonase，能够降解所有形式的DNA和RNA(单链、双链、线形和环状)，而无蛋白水解活性。此步操作可以降低背景，保障实验的可重复性。

Protein A/G Agarose 蛋白A/G琼脂糖珠注意事项

1）请勿冷冻保存本产品。

2）Protein A/G琼脂糖珠使用前一定要充分颠倒若干次，使琼脂糖珠混合均匀。

3）所有操作过程中，样本需要在4℃或冰上操作。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Protein A/G Agarose 蛋白A/G琼脂糖珠yb-1326 SK-HEP-1(肝癌细胞)
yb-1327 HL-60(急性粒细胞白血病细胞)
yb-1328 HCCLM3(肝癌细胞)
yb-1329 TT(人甲状腺癌细胞)
yb-1330 PLC/PRF/5(肝癌亚力山大细胞)
yb-1331 SW579(人甲状腺癌细胞)
yb-1332 RKO(结肠腺癌细胞)
yb-1333 FaDu(人咽鳞癌细胞)
yb-1334 NCI-N87(人胃癌细胞)
yb-1335 DT40(鸡淋巴瘤细胞)
yb-1336 人脑微血管内皮细胞
yb-1337 人脑血管平滑肌细胞
yb-1338 人脑血管周细胞
yb-1339 人脉络丛内皮细胞
yb-1340 人脉络丛上皮细胞
yb-1341 人脉络丛成纤维细胞
yb-1342 人脑膜细胞
yb-1343 人神经细胞
yb-1344 人小脑颗粒细胞
yb-1345 人少突胶质前体细胞-
yb-1347 人少突胶质前体细胞-
yb-1349 人星形胶质细胞
yb-1350 人小脑星形胶质细胞
yb-1351 人小神经胶质细胞
yb-1352 人心脏微血管内皮细胞
yb-1353 人主动脉内皮细胞
yb-1354 人主动脉平滑肌细胞
yb-1355 人心肌细胞
yb-1356 人心肌细胞-成人
yb-1357 人心脏成纤维细胞
yb-1358 人成纤维细胞-成人心室
yb-1359 人成纤维细胞-成人心房