MitoTracker® Red CM-H2XRos是一种细胞渗透型的dihydro-X-rosamine衍生物,包含标记线粒体的弱巯基反应性的氯甲基官能团。本品是一种还原型的红色荧光染料(Ex=579 nm,Em=599 nm),本身不发荧光。只需简单孵育细胞,即可被动运输穿过细胞膜,进入细胞后被氧化为发荧光且具线粒体选择性的探针,聚集在活性线粒体上。一旦线粒体被染色后,还能根据后续实验的需求进行固定(醛类固定剂如甲醛)和透化(醛类去污剂如Triton X-100),探针依然维持在细胞内。本品适合双标实验,因其红色荧光与其他的绿色荧光探针具有良好的分辨率。
虽然传统的线粒体荧光探针如TMR和罗丹明123,也能很容易的聚集在功能线粒体上,但是一旦线粒体膜电位丧失即会被洗掉,从而在一些需要细胞进行醛类固定或者包含线粒体能量状态影响因子的实验中,使其应用大受限制。
MitoTracker® Red CM-H2XRos线粒体红色荧光探针产品性质
注意:1)本品MitoTracker® Red CM-H2XRos是还原型的荧光探针,使用的工作液浓度比氧化型(MitoTracker® Red CM-XRos)的浓度一般高3~5倍。以上推荐的浓度是针对氧化型MitoTracker® Red CM-XRos,请使用本品(还原型)时进行适当的浓度调整。2)血清中可能含氧化酶,影响本还原型探针的稳定性。则不建议使用含血清的完全培养基稀释储存液。
3染色及检测
1)壁细胞的染色
培养皿/板内加入适量的培养基覆盖盖玻片进行爬片培养。当细胞长至所需丰度,吸除培养液,加入37℃预热的MitoTracker® Red CM-H2XRos染色工作液。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min(最佳孵育时间需优化)。染色结束后,使用新鲜培养液或缓冲液替换上述染色液,即可将其置于荧光显微镜下观察或荧光酶标仪下读数。或者进行后续的固定和透化步骤,见步骤4。
2)浮细胞的染色
离心收集细胞,吸除上清,利用37℃预热的MitoTracker® Red CM-H2XRos染色工作液轻轻重悬细胞。在所使用细胞正常培养条件下孵育15-45 min(最佳孵育时间需优化)。染色结束后,离心收集细胞,利用37℃预热的新鲜培养液或缓冲液重悬细胞,被染色的细胞可用流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜进行分析。