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文献和实验性起调节作用。很多凋亡的关键步骤包括caspase激活物的释放和电离子通道的改变,以及线粒体膜电位差的丢失等都发生于线粒体,因此线粒体 对凋亡的发生或抑制起重要作用。 (一)细胞色素C释放与凋亡复合体的形成 在研究哺乳细胞凋亡的生物化学反应时,发现某些位于线粒体内膜的蛋白可以直接启动细胞凋亡,并导致细胞色素C释放到细胞质或细胞核。被释放的细胞色素C可以和Apaf―1结合,改变其构象,大大增加后者与dATP/ATP的亲和性,并且使细胞色素C―Apaf―1形成多聚体。与此
与线粒体基质,细胞死亡时不会被释放。 Calreticulin(钙网织蛋白):内质网腔 【Note:这些蛋白均为胞浆蛋白,爬片或胰酶消化的细胞在做免疫荧光前需先透膜(permeablize),可采用0.1%SDS处理】 自噬与细胞死亡经常需一起考虑,下面介绍一些检测细胞死亡的方法: (1)△ψm dissipation(线粒体跨膜电位的消失):TMRM发红色荧光,DiOC6(3)发绿色荧光。 (2)Phosphatidylserine
(TMRM)等可结合到线粒体基质,其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。方法:将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123(1mM)或终浓度为DiOC6(25nM),JC-1(1mM),TMRM(100nM),37°C平衡30min,流式细胞计检测细胞的荧光强度。 注意事项 1. 始终保持平衡染液中pH值的一致性,因为pH值的变化将影响膜电位。 2. 与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白,他们将与部分染料结合,降低染料的浓度,引起
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