FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽

FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽背景描述
鬼笔环肽（Phalloidin）是一种来源于毒蕈类鬼笔鹅膏（Amanita phalloides）的环状七肽毒素，以高亲和力（Kd= 20 nM）选择性结合于丝状肌动蛋白F-actin，而不会与单体肌动蛋白G-actin结合，通常用来标记组织切片，细胞培养物或无细胞体系中的F-actin，从而对F-actin进行定性和定量分析。另外，鬼笔环肽衍生物也以相近的亲和力结合于大小纤维，无论是动植物来源的肌肉细胞或非肌肉细胞，按照每一个肌动蛋白亚基约与一个鬼笔环肽分子的计量比结合。且非特异性结合几乎可忽略，染色区域和非染色区域辨识度非常明显。因此，鬼笔环肽衍生物特别适合替代肌动蛋白（Actin）抗体进行相关研究。另外鬼笔环肽衍生物很小，直径约12-15Å，分子量＜2000 Daltons，未标记肌动蛋白（Actin）的许多生理特性都得以维持，比如，同肌动蛋白结合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能发生反应；鬼笔环肽标记的纤维丝仍可穿透固相肌球蛋白基质；以及甘油抽提的肌纤维标记后仍可收缩等。
鬼笔环肽（Phalloidin）的结合阻止丝状肌动蛋白（微丝）的解离，稳定微丝结构，从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一种聚合促进剂。此外，鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
FITC标记的鬼笔环肽，染色反应特异性强，对比性高，具有比Actin抗体更好的染色效果，适合用作F-actin的定性和定量检测。另外，经本品结合后的F-actin仍能维持actin自身具有的许多生物学特性。且本品的结合没有物种差异性，适用性广泛。
我司分别提供冻干粉形式（货号：40735ES80）和储存液形式（货号：40735ES75，浓度为20µM）的FITC标记鬼笔环肽，用户根据自身需求选择。建议使用浓度为80~200nM。
产品性质

分子式（Molecular Formula）	C56H60N10O15S2
分子量（Molecular Weight）	1177.3
最大激发/发射波长（Ex/Em）	495~496/513~516nm
多肽序列（Sequence）	FITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6)
外观（Appearance）	黄色粉末（冻干粉）
溶解性（Solubility）	溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液（20%）

运输与保存方法
冰袋运输。-20℃避光干燥保存， 1年有效。
注意事项
1. 鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人的半数致死剂量LD₅₀约2mg/kg）。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽
需要自备材料
1. （可选）甲醇
2. 1×PBS缓冲液, pH 7.4, 细胞培养级别（货号：60145ES76）
3. 固定液4%多聚甲醛（溶于PBS缓冲液）（货号：36314ES60）
4. 丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS缓冲液）
5. Fluoromount-G^TM 水溶性封片剂（不含DAPI）（货号：36307ES08），DAPI（货号：40727ES10）
6. （可选）DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片剂（含DAPI）（货号：36307ES08）
7. （可选）BSA，标准级别（货号：36101ES25）
8. 载玻片和盖玻片
9. 盖玻片周围密封液（如透明指甲油）
10. 组装有FITC激发/发射滤片，以及DAPI激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。
FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽操作步骤
1. 工作液准备

1. ）对于FITC标记鬼笔环肽（货号：40735ES75，300T）
2. 20µM储存液形式提供，总量为300µl。按照100 nM的工作液浓度来换算，可制备总量为60 ml的工作液。建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，-20℃避光冻存，一年稳定。
3. 1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为：80~200nM。工作液现配现用。
2. ）对于FITC标记鬼笔环肽（货号：40735ES80，1mg）
3. 1177.3，总量为1mg。可先用甲醇或者DMSO充分溶解配制成20~100µM的储存液。如，加入8.494ml甲醇到1mg鬼笔环肽即得到100µM等量的储存液，根据单次使用量，进行小量分装，-20℃避光冻存，一年稳定。
4. 1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为：80~200nM。工作液现配现用。

2. 染色步骤
1） 细胞爬片生长24h，使其密度达到50%汇合度。
2） 吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH 7.4）清洗细胞2次。

3. ） 使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10min。
4. 避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。

4） 室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。
5） 室温条件下，用丙酮（≤-20℃）脱水或者用0.5% Triton X-100溶液透化处理5min。
6） 室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。

7. ） 取200µl配制好的 FITC标记鬼笔环肽工作液，覆盖住盖玻片上的细胞，室温避光孵育30min（通常情况下，4℃~37℃孵育皆可）。
8. 为了降低背景，可于FITC标记的鬼笔环肽工作液内加入1% BSA；另外，孵育过程中为了避免溶液挥发，可将盖玻片转移到一个密封的容器内。

8） 用PBS清洗盖玻片3次，每次5min。
9） 使用200µl DAPI溶液（浓度：100 nM）对细胞核进行复染，约30s。

10. ） 用PBS清洗盖玻片，然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-G^TM 水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂，然后用指甲油永久封片。此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存，通常6个月内可继续做F-actin染色分析。
11. 也可以直接使用含有DAPI的抗荧光淬灭封片剂（货号：36308ES11）合并步骤9）10），简化步骤。
11. ） 荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择FITC激发/发射滤片（Ex/Em=496/516nm）和DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。

FITC Phalloidin FITC标记鬼笔环肽yb-hxbz-036 人胃癌细胞 (+)9811 规格25毫升/株.
yb-hxbz-038 人胃癌细胞 9811C11 规格25毫升/株.
yb-hxbz-039 绿色荧光蛋白标记人胃癌细胞 MGC803-GFP 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
yb-hxbz-040 人胃癌细胞 BGC-803 规格25毫升/株.
yb-hxbz-041 人胃癌顺铂耐药株 SGC7901/DDP 规格25毫升/株.
yb-hxbz-042 人结肠癌细胞 CRL-2780 规格25毫升/株.
yb-hxbz-043 人胚胎肠粘膜细胞 CCC-HIE-2 规格25毫升/株.
yb-hxbz-044 人结肠癌细胞 CACO-2 规格25毫升/株.
yb-hxbz-045 人结肠癌细胞 Colo205 规格25毫升/株.
yb-hxbz-046 人结肠癌细胞 Colo320DM 规格25毫升/株.
yb-hxbz-047 人结直肠癌细胞 HCT116 规格25毫升/株.
yb-hxbz-048 人结肠腺癌细胞 HCT-8 规格25毫升/株.
yb-hxbz-049 耐长春新碱结肠癌细胞系 HCT-8/VCR 规格25毫升/株.
yb-hxbz-050 人结肠腺癌细胞 HT-29 规格25毫升/株.
yb-hxbz-051 人十二指肠腺癌细胞 HuTu-80 规格25毫升/株.
yb-hxbz-052 人结肠癌细胞 Loo 规格25毫升/株.
yb-hxbz-053 人结肠癌细胞 SW480 规格25毫升/株.
yb-hxbz-054 人结肠癌细胞 SW620 规格25毫升/株.
yb-hxbz-055 人结肠癌细胞 T84 规格25毫升/株.
yb-hxbz-056 人结肠癌细胞 Lovo 规格25毫升/株.
yb-hxbz-057 结直肠癌细胞 LOVE1 规格25毫升/株.
yb-hxbz-058 人结肠癌细胞 Ls-174-T 规格25毫升/株.
yb-hxbz-059 人结肠癌细胞 LS174T 规格25毫升/株.
yb-hxbz-060 人结肠癌细胞 CW-2 规格25毫升/株.
yb-hxbz-061 人结肠癌细胞 RKO 规格25毫升/株.
yb-hxbz-062 人结肠癌转基因细胞 RKO-AS45-1 规格25毫升/株.
yb-hxbz-063 人结肠癌转基因细胞 RKO-E6 规格25毫升/株.
yb-hxbz-064 人大肠癌细胞 CL187/CCL187 规格25毫升/株.
yb-hxbz-065 人大肠癌细胞 SW116 规格25毫升/株.
yb-hxbz-066 人大肠癌细胞 PA319 规格25毫升/株.
yb-hxbz-067 人盲肠腺癌细胞（未分化） Hce-8693 规格25毫升/株.
yb-hxbz-068 人结直肠腺癌细胞 HCT-15 规格25毫升/株.
yb-hxbz-069 人结直肠腺癌细胞 LS174T 规格25毫升/株.
yb-hxbz-070 人结肠腺癌细胞 LS180 规格25毫升/株.
yb-hxbz-071 人高分化结肠腺癌细胞系 THC-8307 规格25毫升/株.
yb-hxbz-072 人结直肠腺癌上皮细胞 DLD-1 规格25毫升/株.
yb-hxbz-073 人小肠癌细胞系 HIC 规格25毫升/株.
yb-hxbz-074 人结肠癌细胞 HRT-S1 规格25毫升/株.
yb-hxbz-075 人直肠腺癌细胞系 HRC-99 规格25毫升/株.
yb-hxbz-076 人胰腺癌细胞 PANC-1 规格25毫升/株.