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上海钰博
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上皮样
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干冰运输
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贴壁生长
Collagenase I 胶原酶I型产品描述
胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解
结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。
目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型，在应用上有所偏向：1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
本品为I型胶原酶，≥250 U/mg solid，可用于上皮、肝、肺、脂肪和肾上腺等组织和细胞的解离。
Collagenase I 胶原酶I型酶活力单位定义
在37℃，pH7.5 的条件下，5h内水解胶原产生相当于1µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
运输和保存方法
室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Collagenase I 胶原酶I型使用方法
1. 胶原酶储存液的配制
向每管100mg的胶原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成1g/ml（即1000×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。
使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5mg/ml，用于软骨消化的常用浓度为1-2mg/ml，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。
2．组织的分离
1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm大小的组织块；
2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次；
3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；
4）于37℃孵育4-18h。消化时使用水平摇床以及用3mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。
5） 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；
6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
3． 器官灌注
1）向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶，另添加3mM的CaCl2有助于提高分离效率；
2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；
3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；
4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
Collagenase I 胶原酶I型yb-1146 SMMC-7721(肝癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1147 SMC-1(胸膜细胞瘤). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1148 QGY-7703(肝癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1149 NCI-H446 [H446](小细胞肺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1150 QGY-7701(肝癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1151 BEL-7405(肝癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1152 NCI-H460 [H460](大细胞肺癌细胞0. 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1153 NCI-H460 [H460](大细胞肺癌细胞0. 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1154 BEL-7404(肝癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1155 BEL-7402(肝癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1156 QG-56(肺扁平上皮癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1157 SPC-A-1(肺腺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1158 HGC-27(胃癌细胞（未分化）). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1159 LTEP-a-2(肺腺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1160 AGS(胃腺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1161 MGC80-3(胃癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1162 95-D(高转移肺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1163 BGC-823(胃腺癌细胞（低分化）). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1164 BT549(乳腺管癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb-1166 T-47D(乳腺管癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb-1168 TE-11(食管癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb-1172 ZR-75-30(乳腺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1173 TE-1(食管癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1174 Bcap-37(乳腺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1175 Eca-109(食管癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1176 MDA-MB-453(乳腺癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1177 CNE(鼻咽癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1178 JAR(胎盘绒毛癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb-1180 NIH:OVCAR-3(卵巢癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1181 KB(口腔表皮样癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1182 SK-OV-3(卵巢癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1183 Acc-3(涎腺腺样囊性癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1184 HO-8910PM(高转移卵巢癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1185 Acc-2(涎腺腺样囊性癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1186 HO-8910(卵巢癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1187 Tca-8113(舌鳞癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1188 HCC 94 [HCC941122](子宫鳞癌细胞（高分化）). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1189 A-431(表皮癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1190 HeLa 229(宫颈癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1191 CBRH-7919(肝癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶，一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。许多蛋白酶都能水解单链且变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。
本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（更准确的称法为梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维。还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别能够有效水解
结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白，多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。
目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶I型，II型，III型和IV型，在应用上有所偏向：1）胶原酶I（Type I Collagenase）：含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；2）胶原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备；3）胶原酶III（Type III Collagenase）：含有较低的蛋白酶活性，常用于乳腺细胞的制备；4）胶原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰酶活性，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。
本品为I型胶原酶，≥250 U/mg solid，可用于上皮、肝、肺、脂肪和肾上腺等组织和细胞的解离。
Collagenase I 胶原酶I型酶活力单位定义
在37℃，pH7.5 的条件下，5h内水解胶原产生相当于1µM L-亮氨酸的酶量定义为1个酶活力单位。
运输和保存方法
室温运输。4℃避光保存，2年有效。储存液-20℃避光冻存。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Collagenase I 胶原酶I型使用方法
1. 胶原酶储存液的配制
向每管100mg的胶原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡盐溶液，含Ca2+、Mg2+），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成1g/ml（即1000×）的储存液。然后用低蛋白结合性的0.22μm的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。
使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5mg/ml，用于软骨消化的常用浓度为1-2mg/ml，需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。
2．组织的分离
1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm大小的组织块；
2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗涤组织块数次；
3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度；
4）于37℃孵育4-18h。消化时使用水平摇床以及用3mM的CaCl2补充消化可以提高消化效率。
5） 已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃继续孵育；
6）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
3． 器官灌注
1）向37℃预热的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入胶原酶，另添加3mM的CaCl2有助于提高分离效率；
2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液；
3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于37℃进一步孵育；
4）利用不含胶原酶的HBSS洗涤收集的细胞数次；
5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。
6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。
Collagenase I 胶原酶I型yb-1146 SMMC-7721(肝癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb-1148 QGY-7703(肝癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb-1163 BGC-823(胃腺癌细胞（低分化）). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1164 BT549(乳腺管癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb-1188 HCC 94 [HCC941122](子宫鳞癌细胞（高分化）). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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文献和实验相关实验
卵巢癌（Ovarian Cancer）是最具破坏性的妇科癌症，目前 5 年总生存率低至 47%【1】。卵巢癌是一种高度异质性疾病，通常根据组织病理学、分子生物学和遗传学分析的结果，将卵巢癌分为两大类：I 型卵巢癌病情进展缓慢，主要为低级别浆液性癌（LGSC），粘液癌，子宫内膜样癌，透明细胞癌等；II 型癌症则进展迅速，主要为高级别浆液性癌（HGSC）、未分化癌和癌细胞瘤。 治疗卵巢癌的标准方式是手术切除和铂-紫杉醇化疗相结合，然而这类化疗方式往往对于透明细胞癌和粘液癌患者无效
目前中医药治疗NIDDM 的实验研究, 大多借用链脲佐菌素(St repozotocin , 简称STZ)或四氧嘧啶所致的糖尿病大鼠模型,其特点是胰岛素分泌缺乏所致的高血糖和“三多一少症”(多饮、多食、多尿、消瘦) ,与人类胰岛素依赖型糖尿病( IDDM) 相似,而与NIDDM的病理特征和临床特点相差甚远。实验性性NIDDM 大鼠模型具有Ⅱ型糖尿病的临床特点和病理特征, 尤其是存在受体和受体后缺陷所致的胰岛素抵抗的特征, 是实验研究中医药改善胰岛素抵抗作用的较好载体。主要试剂与设备: STZ
动脉,并以此为标志,在颈总动脉分为颈内外动脉交叉处找到上颈交感节, 取出上颈交感节, 置于含 1 % 胶元酶(Collagenase)和1 % 消化酶(Dispase)的2ml混合消化液中消化(37℃， 1 h)分散后，用种植(Plating)培养液稀释成0.2×105个细胞/ml密度的的细胞悬液；接种于涂有小牛皮胶或以小鼠脑皮层胶质细胞为背景的35mm塑料培养皿中，每皿2ml细胞悬液置。置标本于36℃、10%CO2培养箱中培养。24h后倾去培养皿内种植培养液,改用饲养(Feeding)培养液培养
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