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- 2025年11月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海古朵生物有限公司
- 检测范围：
科研
- 检测方法：
酶联检测
- 适应物种：
小鼠
- 规格：
48T/96T
胚胎干细胞系MESPU30ELISA
货号：GD-NB6123
规格:48T/96T
运输条件:2-8℃低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。
待检样本:体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等等。
胚胎干细胞系MESPU30ELISA洗涤方法:
1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μl，注入与吸出间隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μl，浸泡1-2分钟，吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。洗板5次。
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分钟内配制)，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。
3.弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μl /每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(临用前15分钟内配制)100μl，加上覆膜，37℃温育1小时。
5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6.每孔加底物溶液100μl，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止)。
7.每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。
9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。
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文献和实验多能干细胞技术中，母源因子、干细胞的核因子以及转录因子分别起到了重编程体细胞的作用，李劲松研究组的科研人员将这三种重编程因子结合到一种方法中，大大地促进了体细胞重编程的效率。他们将体细胞的核注入到未去核的卵母细胞中，经过激活、体外培养等过程，最后有30%的重构卵能形成胚胎干细胞系，即平均每三个卵母细胞能够成功地诱导一个体细胞发生重编程，这远远高于平均每10个去核卵母细胞诱导一个体细胞重编程为胚胎干细胞的效率。在这一过程中，母源因子、孤雌发育胚胎的核因子以及孤雌发育胚胎中的Oct4等转录因子的表达都对体细胞的核产生
敲除、条件性基因敲除、基因敲入（点突变或片段敲入）、转基因、定点转基因（过表达）等。近交系和远交系经连续 20 代 (或以上) 的全同胞兄妹交配 (或者亲代与子代交配) 培育而成，近交系数应大于 99%，品系内所有个体都可追溯到一对共同祖先。特点：遗传背景均一，实验结果一致性好；近交系由于近交衰退，生活力弱，对饲养环境要求高，产仔少，营养要求高。由于近交系小鼠具有遗传背景均一、实验结果一致性好的优点，在使用小鼠作为我们研究基因功能或疾病机制的实验动物时，近交系小鼠往往是我们的首选。需要注意的一点
，Kleinsmith 和Pierce 证实了这类肿瘤来自于未分化的胚性癌细胞[4]。细胞培养技术的发展，使得众多的研究者都可以从小鼠睾丸畸形瘤建立起体外培养的癌细胞系。70 年代前后，包括剑桥大学的Martin Evans 在内的许多科学家都报道了这种培养方法[5~7]。在这种情况下，Evans 感到必须采用另一种替代方式，由胚胎干细胞产生具有一定遗传特点的生殖细胞系。通过使用单克隆抗体，他鉴定了胚胎干细胞表面的大分子以及它们的配体，从而确定了一系列分化早期的分子标志[13]。这些结果显示，可能存在与胚胎干细胞
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