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上海信裕
Annexin V-Alexa Fluor647/PI 凋亡检测试剂盒产品描述
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor 647标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor 647 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。
Annexin V-Alexa Fluor647/PI 凋亡检测试剂盒产品组分
编号
组分
产品编号/规格
40304ES20（20T）
40304ES50（50T）
40304ES60（100T）
40304-A
Annexin V-Alexa Fluor 647
100 μl
250 μl
500 μl
40304-B
PI Staining Solution (20 μg/ml)
200 μl
500 μl
1.0 ml
40304-C
4×Binding Buffer
4 ml
10 ml
20 ml
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。本试剂盒中所有组分均在4℃保存，Annexin V-Alexa Fluor 647、PI需避光保存。
Annexin V-Alexa Fluor647/PI 凋亡检测试剂盒使用说明
1.1 样品染色
1.a) 悬浮细胞：300g，4℃离心5 min收集细胞。
b) 贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。
2.配制1×Binding Buffer：用去离子水按1:4 稀释4×Binding Buffer（4ml 结合缓冲液+12ml 去离子水）。
3.用预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300g，4℃离心5 min。
4.加入250 μl 1×Binding Buffer重悬细胞，调节其浓度为1×106/ml。
5.取100 μl细胞悬液于5ml流式管中，加入5μl Annexin V-Alexa Fluor 647和10 μl PI，轻轻混匀。
6. 避光、室温反应15 min。
7. 加入400 μl PBS，混匀，样品在1小时内用流式细胞仪检测。
注意：为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。
1.2 流式细胞仪分析
Alexa Fluor 647最大激发波长为651 nm，最大发射波长为667 nm；PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm，最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），Alexa Fluor 647为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10，000 events。
注意事项
1)由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2)对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-Alexa Fluor 647的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3)如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
4) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
5)Annexin V-Alexa Fluor 647和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。
Annexin V-Alexa Fluor647/PI 凋亡检测试剂盒
xy1416 DMEM DMEM DMEM with High-Glucose - L-Glutamine - Sodium Pyruvate and 25 mM HEPES 500 ml ATCC
xy1417 DMEM-prf DMEM-prf DMEM with High Glucose - L-Glutamine and Sodium Pyruvate - phenol red-free 1L ATCC
xy1418 Ham's F-10 Ham's F-10 F-10 with L-Glutamine and 25 mM HEPES 500 ml ATCC
xy1419 Ham's F-12 Ham's F-12 F-12 with L-Glutamine and 25 mM HEPES 500 ml ATCC
xy1420 DMEM/F-12 DMEM/F-12 DMEM/F-12 with L-Glutamine 500 ml ATCC
xy1421 DMEM/F-12 DMEM/F-12 DMEM/F-12 with L-Glutamine and 15 mM HEPES 500 ml ATCC
xy1422 RPMI 1640 RPMI 1640 RPMI 1640 without L-Glutamine - with 25 mM HEPES 500 ml ATCC
xy1423 RPMI 1640 RPMI 1640 RPMI 1640 with L-Glutamine and 25 mM HEPES 500 ml ATCC
xy1424 IMDM IMDM MDM with L-Glutamine and 25 mM HEPES; without alpha-Thioglycerol - 2-mercaptoethanol 500 ml ATCC
xy1425
xy1426
xy1427
xy1428
xy1429
xy1430 rhSCF 重组人干细胞因子 Recombinant Human Stem Cell Factor 2μg
xy1431 rhG-CSF 重组人粒细胞集落刺激因子 Recombinant Human Granulocyte Colony Stimulating Factor 2μg
xy1432 rhGM-CSF 重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 Recombinant Human Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor 5μg
xy1433 rhM-CSF 重组人巨噬细胞集落刺激因子 Recombinant Human Macrophage Colony Stimulating Factor 2μg
xy1434 rhTNF-α 重组人肿瘤坏死因子-α Recombinant Human Tumor Necrosis Factor-alpha 10μg
xy1435 rhTNF-α-His 重组人肿瘤坏死因子-α,His Recombinant Human Tumor Necrosis Factor-alpha,His 10μg
xy1436 rhTNF-α Vari 重组人肿瘤坏死因子-αVariant Recombinant Human Tumor Necrosis Factor- alpha Variant 10μg
xy1437 rhBAF 重组人B细胞活化因子 Recombinant Human B Cell Activating Factor 5μg
xy1438 rhOSM 重组人抑瘤素-M Recombinant Human Oncostatin-M 2μg
xy1439 rhOSM 209a.a. 重组人抑瘤素-M209a.a. Recombinant Human Oncostatin-M 209a.a. 2μg
xy1440 rhAK1-3 重组人血管抑素K1-3 Recombinant Human Angiostatin K1-3 10μg
xy1441 rhEndostatin 重组人血管内皮抑素 Recombinant Human Endostatin 2μg
xy1442 rhaFGF 重组人成纤维细胞生长因子--酸性 Recombinant Human Fibroblast Growth Factor- acidic 10μg
xy1443 rhbFGF 重组人成纤维细胞生长因子--碱性 Recombinant Human Fibroblast Growth Factor-basic 10μg
xy1444 rhKGF-1 重组人角质细胞生长因子-1 Recombinant Human Keratinocye Growth Factor-1 2μg
xy1445 rhFGF-9 重组人成纤维细胞生长因子-9 Recombinant Human Fibrobalst Growth Factor-9 5μg
xy1446 rhKGF-2 重组人角质细胞生长因子-2 "Recombinant Human Keratinocye Growth Factor-2
" 5μg
xy1447 rhFGF-19 重组人成纤维细胞生长因子-19 "Recombinant Human Fibrobalst Growth Factor-19
" 5μg
xy1448 rhFGF-21 重组人成纤维细胞生长因子-21 "Recombinant Human Fibrobalst Growth Factor-21
" 5μg
xy1449 rhIGF-I 重组人IGF-I "Recombinant Human IGF-I
" 20μg
Annexin V-Alexa Fluor 647/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-Alexa Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor 647标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor 647 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。
Annexin V-Alexa Fluor647/PI 凋亡检测试剂盒产品组分
编号
组分
产品编号/规格
40304ES20（20T）
40304ES50（50T）
40304ES60（100T）
40304-A
Annexin V-Alexa Fluor 647
100 μl
250 μl
500 μl
40304-B
PI Staining Solution (20 μg/ml)
200 μl
500 μl
1.0 ml
40304-C
4×Binding Buffer
4 ml
10 ml
20 ml
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。本试剂盒中所有组分均在4℃保存，Annexin V-Alexa Fluor 647、PI需避光保存。
Annexin V-Alexa Fluor647/PI 凋亡检测试剂盒使用说明
1.1 样品染色
1.a) 悬浮细胞：300g，4℃离心5 min收集细胞。
b) 贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。
2.配制1×Binding Buffer：用去离子水按1:4 稀释4×Binding Buffer（4ml 结合缓冲液+12ml 去离子水）。
3.用预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300g，4℃离心5 min。
4.加入250 μl 1×Binding Buffer重悬细胞，调节其浓度为1×106/ml。
5.取100 μl细胞悬液于5ml流式管中，加入5μl Annexin V-Alexa Fluor 647和10 μl PI，轻轻混匀。
6. 避光、室温反应15 min。
7. 加入400 μl PBS，混匀，样品在1小时内用流式细胞仪检测。
注意：为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。
1.2 流式细胞仪分析
Alexa Fluor 647最大激发波长为651 nm，最大发射波长为667 nm；PI-DNA复合物的最大激发波长为535 nm，最大发射波长为615 nm。用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），Alexa Fluor 647为横坐标，PI为纵坐标。每个样采集10，000 events。
注意事项
1)由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2)对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-Alexa Fluor 647的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3)如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
4) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
5)Annexin V-Alexa Fluor 647和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。
Annexin V-Alexa Fluor647/PI 凋亡检测试剂盒
xy1416 DMEM DMEM DMEM with High-Glucose - L-Glutamine - Sodium Pyruvate and 25 mM HEPES 500 ml ATCC
xy1417 DMEM-prf DMEM-prf DMEM with High Glucose - L-Glutamine and Sodium Pyruvate - phenol red-free 1L ATCC
xy1418 Ham's F-10 Ham's F-10 F-10 with L-Glutamine and 25 mM HEPES 500 ml ATCC
xy1419 Ham's F-12 Ham's F-12 F-12 with L-Glutamine and 25 mM HEPES 500 ml ATCC
xy1420 DMEM/F-12 DMEM/F-12 DMEM/F-12 with L-Glutamine 500 ml ATCC
xy1421 DMEM/F-12 DMEM/F-12 DMEM/F-12 with L-Glutamine and 15 mM HEPES 500 ml ATCC
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xy1444 rhKGF-1 重组人角质细胞生长因子-1 Recombinant Human Keratinocye Growth Factor-1 2μg
xy1445 rhFGF-9 重组人成纤维细胞生长因子-9 Recombinant Human Fibrobalst Growth Factor-9 5μg
xy1446 rhKGF-2 重组人角质细胞生长因子-2 "Recombinant Human Keratinocye Growth Factor-2
" 5μg
xy1447 rhFGF-19 重组人成纤维细胞生长因子-19 "Recombinant Human Fibrobalst Growth Factor-19
" 5μg
xy1448 rhFGF-21 重组人成纤维细胞生长因子-21 "Recombinant Human Fibrobalst Growth Factor-21
" 5μg
xy1449 rhIGF-I 重组人IGF-I "Recombinant Human IGF-I
" 20μg
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文献和实验相关实验
Q：Annexin V 凋亡检测试剂盒的原理是什么？ A：Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 PS 有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的 PS 与凋亡早期细胞胞膜结合，将 Annexin V 标记荧光染料如 FITC 利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)或 7-AAD 可与双链 DNA 特异性结合，并产生强烈的荧光，正常情况下无法透过细胞膜。由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，核染料 PI 或 7-AAD
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞： 按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
示例： Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。 Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。 实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 流式检测细胞凋亡的数据分析方法： 1） 选中所有颗粒，将FSC
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