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上海钰博
人大隐静脉平滑肌细胞完全培养基中已包含了高质量的血清和人大隐静脉平滑肌细胞所需生长因子,可直接用于人大隐静脉平滑肌细胞的培养。
注意事项:
1. 培养基为低温长途运输,收到后请先查看是否有漏液、破损或污染等,若出现问题请及时和我们联系。
2. 用75%的酒精擦拭瓶身,4℃保存。
A、 人大隐静脉平滑肌细胞完全培养基划线获得单个菌落的方法。划不出单个菌落的原因:
(1) 平板上有过多的水分;
(2) 划线时接种环未经反复灼烧。
(3) 多区划线,三区或四区划线。
B、 人大隐静脉平滑肌细胞完全培养基涂布和倾注的区别:
涂布利于观察,但由于涂布棒上会带有少量的菌液,影响计数的准确性。
涂布更为准确,但不利于观察菌落的状态。
C、 人大隐静脉平滑肌细胞完全培养基培养基配制时应注意的问题:
(1)灭菌温度要严格控制,按照要求灭菌,尤其含糖量较高的培养基温度不应太高,过高会导致糖分焦化,影响质量。
(2)琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分。
(3)培养基不能反复灭菌,反复灭菌也会导致营养成分的破坏。
(4)含琼脂的培养基灭菌后,要摇匀。
D、 人大隐静脉平滑肌细胞完全培养基平板的保存:大多数平板如VRBA、DC、、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。
E、 人大隐静脉平滑肌细胞完全培养基产品的保存:
(1) 干粉培养基:避光干燥,结块后不能使用。
(2) 亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等:冷冻保存,使用时,要常温解冻,避免水浴加热。
(3) 抗生素类:冷藏保存,温度过高会导致灵敏度的下降。
(4) 兔血浆:冷藏保存少量的红色不会影响结果。
F、人大隐静脉平滑肌细胞完全培养基观察时间的掌握:按SN、GB等标准或培养基的使用说明所述时间进行观察,时间过短或时间过长,单菌落的特征都不会很明显。如单增李斯特氏菌显色培养基,时间短单菌落看不到卵磷脂环,时间长绵羊李氏菌也会产生沉淀环。OXA、PALCAM的观察也如此,时间过长,李氏菌使整个平板成黑色,不利于观察单个菌落。
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华之风问:请教园里战友,本人拟用siRNA转染做平滑肌细胞,观察基因沉默后效果的,但是我们实验室环境不太好,细胞培养容易污染,想加双抗,但不知道加双抗对基因转染沉默有无影响,谢谢!丁香园网友hainblue认为:有影响的,以前用脂质体转染的时候,说明书上说的是转染时不要用含有抗生素的培养基。他的解释是可能引起细胞死亡。具体怎么样就不知道了,比较试剂很贵,没钱作者方面的尝试。丁香园网友laugh认为:大多数不可以,因为增加了细胞通透性,抗生素的进入会增加细胞的死亡,但Qiagen
大鼠的血,不知道要不要灭活?答:你直接把采来的血液在离心管里4℃过夜,离心,取上清,在无菌过滤,也可灭活,然后分装冻存,用时再配。3、问:如果灭活会不会对血清中的一些因子有损伤?答:加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。灭活一般不会对血清中的一些因子损伤的。六、心肌细胞原代培养时血清的使用问题。1、问:在进行心肌细胞原代培养时,需要用含血清的培养基
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