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- P0201，P0202
- 2025年07月15日
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杭州立昂科技有限公司
大体积体系（P0201）操作步骤如下：
1、将中空的50 毫升离心管盖套入装有脱盐介质的内管，移去内管封口。
2、在内管脱盐介质中加入10 毫升缓冲液，同时静置3 分钟以充分水化。
3、将内管放入50 毫升离心管中，拧紧管盖与离心管套紧以固定内管。
4、将离心管放入水平转头，平衡后500 x g 离心15 分钟，弃甩出液。
5、待脱盐蛋白质液样从内管介质中部缓慢加入，静置1 分钟。
6、将离心管放入水平转头，平衡后500 x g 离心15 分钟，收集甩出液，即为脱盐的蛋白质纯品样。
小体积体系（P0202）操作步骤如下：
1、打开外管管盖，向内管脱盐介质加入0.8 毫升缓冲液，静置3 分钟以充分水化。
2、盖紧管盖，将整套管系在固定角转头1000 x g 离心2 分钟，弃甩出液。
3、将待脱盐蛋白质液样从内管介质中部缓慢加入，静置1 分钟。
4、将整套管系在固定角转头1000 x g 离心2 分钟，收集甩出液，即为脱盐的蛋白质纯品样。
一、大体积脱盐（0.2到2.5毫升）
下表为2.5毫升不同浓度牛血清白蛋白（BSA）溶液经过速主TM脱盐柱脱盐后所得蛋白回收率，以及同体积同浓度系列黄色荧光蛋白（YFP）溶液经速主TM脱盐柱和进口脱盐柱脱盐后蛋白回收率的比较。
| 浓度（mg/mL） | YFP回收率（%） | BSA回收率（%） | |
| 立昂SpeedoTM | 进口品牌 | 立昂SpeedoTM | |
| 0.2 | 80 | 60 | 75 |
| 0.4 | 85 | 75 | 86 |
| 0.6 | 90 | 80 | 94 |
| 0.8 | 93 | 83 | 95 |
| 1.5 | 95 | 85 | 95 |
| 2.0 | 95 | 88 | 96 |
| 2.5 | 95 | 89 | 96 |
此外，0.5M氯化钠样品用SpeedoTM脱盐柱和进口脱盐柱的脱盐效果比较如下：
| 柱内填料体积 | 上样量 | 脱盐率 | |
| 本公司 | 6 mL | 2 mL | >95% |
| 进口 | 8 mL | 2 mL | 90-95% |
二、小体积脱盐（100到200微升）
使用小体积脱盐柱（0.7毫升胶体积），100微升0.1 mg/mL浓度的HRP脱盐后得到70%以上蛋白回收率；200微升0.5M氯化钠溶液的脱盐率大于95%，相比进口品牌65%的脱盐率。
订购信息：
| 编号 | 描述 | 规格 |
| P0201 | 速主TM离心快速脱盐柱，6毫升胶体积 | 30次 |
| P0202 | 速主TM离心快速脱盐柱，0.7毫升胶体积 | 30次 |
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文献和实验1. 去垢剂类型和特点表 常用的去垢剂大概有十几种，根据膜蛋白分子量可选用下面两根预装柱进行快速筛选： 表 2. 用两根预装柱快速筛选去垢剂结果表 运行流速设为 0.5 mL/min，15 min 以内就可以筛选一个去垢剂，而且上样量 5-50μL，可节省样品。 标签 摸索得到合适的去垢剂之后，就可以进行常规的层析实验。 增溶之后，高速离心取上清过亲和层析柱，为了减少后续的处理步骤，往往设计较小的标签，一般使用 HIS 或者 Strep，如果使用 GST 标签，则需要引入酶切位点。 标签
的 Tm 值略高，在这种情况下引物退火的效率会下降，但是特异性将增加；另外，在极少数情况下接头的 2NH2 也会延伸，补平接头，这样也产生了 AP1 的结合位点，从而增加了非特异性扩增，但在高温下，接头的自我退火比引物与接头退火的效率高，就提高了针对于 AP1 的 PCR 抑制效应，减少非特异性扩增。在随后的循环中，退火和延伸温度比 Tm 值略低，有利于特异性产物的指数增长。基因组步行技术主要应用于一些只知部分 cDNA 序列的基因的启动子或其他上游调控序列的快速克隆，该技术也可用于确定内元/外元
并洗脱到不同的组分中。 图8 凝胶过滤层析流程 （A）电子显微镜下的填料颗粒放大图。（B）样品中不同分子进入填料不同孔的示意图。（C) 分离过程的描述 (i）上样到层析柱；（ii）最小的分子（黄色）比最大的分子（深橘色）相比在层析柱上延迟更多；（iii）最大的分子最早被从层析柱上洗脱。样品在层析过程中被明显的稀释。（D）层析图谱示意图。 适用性 组群分离：可以从一组较大的分子中去除小分子，或者快速、简单地进行缓冲液置换， 上样体积一般小于30%CV（Column Volume，柱体
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