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- 上海
- DM-CSH2506
- 2025年07月16日
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Matrix metalloproteinases (MMP) zymography (zymography) electrophoresis Kit
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上海笃玛生物科技有限公司
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基质金属蛋白酶（MMP）明胶酶谱法（zymography）电泳分析试剂盒保存方式
保存 凝结液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里； 胶体液（Reagent A）、 促进液（Reagent C）、 胶顶液（Reagent D）、 上样液（Reagent F）、 染色液（Reagent I），避免光照，有效保证6月
基质金属蛋白酶（MMP）明胶酶谱法（zymography）电泳分析试剂盒主要用途
基质金属蛋白酶（MMP）明胶酶谱法（gelatin-zymography）电泳分析试剂是一种旨在通过明胶聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，在分离、蛋白复性、底物水解、染色等一系列步骤下，观察并半定量深蓝色背景中的无色清晰的基质金属蛋白酶条带，根据分子量确定特异基质金属蛋白酶及其活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞萃取样品（动物、人体、植物、昆虫等）、培养上清悬液、血清和关节滑液或脑脊液等基质金属蛋白酶-2，9，以及13等活性及其抑制剂的检测。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，条带清晰，重复性好。
基质金属蛋白酶（MMP）明胶酶谱法（zymography）电泳分析试剂盒实验步骤
实验开始前，移取xx毫升 电泳液（Reagent E）到500毫升容器里，加入450毫升用户自备的无离子水，混匀后，标记为 电泳工作液。同时将 胶体液（Reagent A）、 凝结液（Reagent B）、 促进液（Reagent C）和 胶顶液（Reagent D）放进25℃恒温水槽预热。然后进行下列操作。
- 移出xx毫升 胶体液（Reagent A）到50毫升锥形离心管里
- 加入xx微升 凝结液（Reagent B）
- 加入xx微升 促进液（Reagent C）（注意：如果凝结过快，可以适量减少 凝结液（Reagent B）和 促进液（Reagent C））
- 混匀后，即刻移入玻璃槽，避免气泡
- 在室温下孵育45分钟，或直至胶体凝结
- 移出xx毫升 胶顶液（Reagent D）到15毫升锥形离心管里
- 加入xx微升 凝结液（Reagent B）
- 加入xx微升 促进液（Reagent C）（注意：如果凝结过快，可以适量减少 凝结液（Reagent B）和 促进液（Reagent C））
- 混匀后，即刻移入玻璃槽，避免气泡
- 插入0.75毫米厚的10孔梳
- 在室温下孵育45分钟，或直至胶体凝结
- 将玻璃槽移入到电泳槽里
- 加入适量的含有 电泳液（Reagent E）的 电泳工作液
- 小心拔去10孔梳
- 用吸管或1毫升枪头冲洗样品孔备用
- 从－70℃冰箱里取出待测样品（注意：样品须澄清；参见注意事项3）
- 移取10微升样品（20微克总量）到1.5毫升离心管
- 加入xx微升 上样液（Reagent F），混匀
- 室温下静置10分钟
- 小心移取20微升样品到玻璃槽的样品孔里（包括用户自备的蛋白标准样）
- 电泳运行1至2小时，电压为125伏，直至染料前沿到达胶底处
- 关闭电源，取出玻璃板，小心拆开，避免损坏胶体
- 放进塑料盒
- 加入90毫升用户自备的无离子水到塑料盒里
- 加入xx毫升 复性液（Reagent G）
- 室温下，平放在平式摇荡仪上孵育1小时，速度为50RPM
- 小心倒掉复性液
- 加入90毫升用户自备的无离子水到塑料盒里
- 加入xx毫升 消化液（Reagent H）
- 放进37℃培养箱里，在平式摇荡仪上孵育20小时，速度为50RPM（注意：如果酶活性过低，可以延长孵育时间至40小时）
- 小心倒掉消化液
- 加入50毫升用户自备的无离子水到塑料盒里
- 加入xx毫升 染色液（Reagent I），混匀
- 室温下，平放在平式摇荡仪上孵育60分钟，速度为50RPM
- 小心倒掉染色液
- 加入50毫升用户自备的无离子水到塑料盒里
- 加入xx毫升 祛色液（Reagent J），混匀
- 室温下，平放在平式摇荡仪上孵育30分钟，速度为50RPM，直至可见蓝色背景下白色清晰的条带（注意：避免过度去色）
- 小心倒掉祛色液
- 加入xx毫升 终止液（Reagent K）
- 进行拍照记录或成像仪处理和半定量分析：
| 基质金属蛋白酶 | 阳性条带位置 | 说明 |
| MMP-2 | 72 Kd | 无活性的酶（proenzyme/latent） |
| MMP-2 | 62 Kd（或67 Kd） | 活化的酶（active） |
| MMP-9 | 92 Kd | 无活性的酶原（proenzyme/latent） |
| MMP-9 | 82 Kd（或84 Kd） | 活化的酶（active） |
注意基质金属蛋白酶（MMP）明胶酶谱法（zymography）电泳分析试剂盒事项
- 本产品为5次（45个样品）操作
- 操作时，须戴手套
- 样品准备要点如下：
- 必须澄清，至关重要：4℃高速离心5分钟，速度为10000g，置于－70℃保存待测
- 样品中避免使用EDTA、EGTA等二价阳离子鳌和剂以及巯基乙醇和DTT等
- 样品中避免使用硫醇抑制剂（THIOL INHIBITOR）
- 由于TIMP等天然抑制剂的存在，血清样品中的基质金属蛋白酶活性很低，可以使用活化剂（建议使用 胶原酶潜酶活化剂（APMA）－GMS12197）
- 如果验证样品中基质金属蛋白酶，可以使用抑制剂EDTA对照
- 避免培养细胞上清样品显示黄色，表明已经过于酸性，须调整pH为中性方可使用
- 胶体和胶顶配制前，须25℃预热相关试剂
- 电泳前注意清洗样品孔
- 电泳运行，注意安全
- 染色时，避免光照
- 染色后显示的亮带PRO－MMP9（92Kd）、浅带MMP9（82Kd）、亮带PRO－MMP2（72Kd）、亮带MMP2（62Kd）的条带：在深蓝色背景下的白色条带
- 有时会出现多条带（multiple bands），表明酶的降解产物
- 本公司提供系列基质金属蛋白酶酶谱检测试剂产品
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文献和实验问：我们知道明胶酶谱法可用来测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性，但不知其他的基质金属蛋白酶活性的测定，比如我要测MMP-1、MMP-3的活性，是否也可用此法测定呢？急切盼复！答：首先应该弄清楚这些基质金属蛋白酶都属于哪一类型，才能考虑下面的问题。你所提到的四种基质金属蛋白酶：MMP-1属胶原酶（Collagenases）MMP-2和MMP-9明胶酶（Gelatinases）MMP-3属基质溶酶（Stromelysins）进行基质金属蛋白酶活性的测定，MMP-1, MMP
【求助】关于培养中细胞的基质金属蛋白酶(MMPs)的检测问题
: detect the activity of MMPs topicare 谢谢chuckdouble，查了一些文献，还有丁香园里其他战友的经验，似乎单纯用明胶酶谱法只能检测部分MMPs类型，比如MMP2，MMP9吗？不知道明胶酶谱法还能不能检测培养中细胞所分泌的全部类型MMPs。 chuckdouble topicare wrote: 细胞所分泌的全部类型MMPs
多种细胞表达的基质金属蛋白酶。为探讨雌二醇（E2）对人成骨肉瘤MG-63细胞株和正常成人成骨细胞（hOB）膜型基质金属蛋白酶（MT1-MMP）的作用和绝经后骨质疏松症（OP）的作用机制。方法：Northern杂交、Western杂交和激光共聚焦显微系统免疫荧光法分别检测MT1-MMP mRNA和蛋白质表达。MMP-2活性用明胶酶谱和酶联免疫吸附测定检测。结果 首次观察到E2促进MG-63细胞MT1-MMPmRNA表达，并呈剂量依赖关系。E2促进MG-63细胞MT1-MMP蛋白质表达，并呈剂量
