绵羊抵抗素(RETN)酶联免疫试剂盒

绵羊抵抗素(RETN)酶联免疫试剂盒

对策
1.实验前检查试剂的组分及批号，确认所有组分均属于对应的试剂盒。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用
2.避免试剂组分间的交叉污染，确保吸头、容器的干净
3.显色剂 A、B未使用前避光保存
4.孵育温度应控制在 37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。
5.严格按说明书要求洗板
6.放置时间（自然放置 1~2h）及离心转速（3000r/min）、离心时间（15min）应引起注意

出现随机 性的花板、跳孔现象

1.样品离心不完全，反应孔内发生凝血或残留细胞成分
2.加样时交叉污染
3.手工洗板造成的交叉污染
4.洗板机加液头堵塞导致加液不满或吸液残留量较大，造成 花板、跳孔
5.拍板时交叉污染

对策
1.充分离心， 3000rpm6分钟以上
2.加标本时尽量 避免交叉污染。如盛标本的试管周围常有血痂，易脱落，应远离酶标板
3.手工洗板时前 3次注洗液后应立即弃去，后几次再设定浸泡时间，可减少交叉污染
4.疏通加液头，使洗板时每孔均注满洗液，吸液时残留量要小
5.洗板完毕拍板时用合适的吸水纸巾，不要把无关物质拍进板孔，并尽量不要在同位置拍，以免交叉污染


绵羊抵抗素(RETN)酶联免疫试剂盒​
假阳性

假阳性现象是一个现象，可参考上文 “灵敏度过高、板底高、高背景” 中的分析。这里只列举常见的原因及对策
1.计算 Cutoff值时使用的公式不正确，导致计算得出的CutOff值过低，从而导致出现假阳性
2.洗板时未能注满洗液或洗板次数、浸泡时间不够， 洗涤不充分，样 品中有其他成分残留 导致花板、跳孔，假阳性增多
3.血清标本处理不当，如未除去细胞成分、纤维蛋白原及其它干扰物可出现孔底由变蓝的跳孔现象，此标本重复实验结果往往是阴性
4.厂家试剂质量的变化造成
5.水质问题
6.加酶量过多（如 50uL误认为100uL）或丙肝酶稀释时加量过多
7.培养箱温度超过 37℃或酶结合物反应时间或底物显色时间超过
8.底物配制时间过长、或底物污染
9.该批样品放置时间过长，样品污染
10.移液嘴重复使用，未洗净或消毒不完全而用于加酶或底物

对策
1.CutOff值计算公式应严格参照所属产品的说明书，应注意各个酶免产品的Cutoff值计算公式不尽相同
2.严格按说明书要求洗板。调整洗板机时，应注意有时仪器标示的液量与实际液量并不相符，应根据实际情况调整至每孔注满
3.放置时间（自然放置 1~2h）及离心转速（3000r/min）、离心时间（15min）应引起注意
4.国家标准要求提高灵敏度时，厂家试剂灵敏度也相应提高，假阳率常常有所上升，但只要在合理范围，是可以接受的
5.防止蒸馏水污染
6.加酶前检查移液器调节量是否准确，稀释酶时思想要集中。
7.放入板以前要检查培养箱的温度，准确定时
8.底物应在酶反应完毕即将洗涤前 5分钟配制，注意避光
9.样品应保持新鲜，或低温保存，防止污染
10.移液嘴尽可能一次性使用

重复性差
1.样品数量不一，加样时间长短不一
2.样品加入后未混匀
3.酶标仪滤光片不对或输入波长不对
4.酶标仪测定重复性差
5.洗涤不正确
6.温育条件不一致（一次用水育，一次用恒温箱）
7.慎多加或少加酶或显色剂
8.阈值附近时阴时阳
9.加样量不足、保温时间、洗涤条件一致

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对策
1.重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近
2.加样后在混匀器上充分混匀
3.TMB显色用450/630波长
4.校对酶标仪
5.洗涤液注满各孔但不要溢出。洗板时反应板面向下，垂直用力甩净内容物（可多甩几次），在干净、无或少尘的吸水材料上拍干。洗板机洗板时不应有堵孔，洗涤应充分
6.恒温箱温育较水浴显色深，?OD值高出0.1-0.15,最好均采用恒温箱.如用水浴水温应控制在37℃
7.多加时显色深，少加则浅，用记号笔圈上，便于分析
8.同一样品做三个复孔，以二个（含二个以上相同结果为准）
9.尽可能使用同一移液器和装紧吸嘴重复测定标本。条件、人员等应尽量与上次保持一致

细胞：
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2 培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静
置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观
察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全
培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和Procell技术部
沟通由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知
细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
5. 该细胞只可用于科研
备注：由于实验所用试剂与操作环境的不同，以上方法供各实验室参考。

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美国研究人员合成一种水凝胶高分子材料用于关节软骨的修复

来自美国的研究人员近日开发出一种新的高分子材料，它能够帮助修复受损的关节软骨，有望为骨关节炎患者带来福音。

关节软骨中存在着一种名为糖胺聚糖的大分子物质，它能够与水分子结合，帮助关节承担负荷，抵抗磨损。在骨关节炎患者中，软骨中的糖胺聚糖含量减少，关节软骨承受负荷能力下降，因此患者会经常感到疼痛。

来自美国波士顿大学的研究人员尝试用合成的高分子材料修复受损的关节软骨。他们选择了两种亲水性良好的聚合物单体，将关节软骨浸泡在含有这两种单体以及光引发剂的溶液中。一段时间后，聚合物单体和光引发剂渗透进软骨中。随后他们再用特定波长的光照射软骨，光照使得光引发剂引发两种单体的聚合，形成一个能够高度吸水的聚合物网状结构，即通常所说的水凝胶。这个水凝胶穿插在原有的糖胺聚糖的网络中，对后者起到了支撑作用。体外实验表明，受损的关节软骨在经过这种处理后，抗负荷和耐磨损的能力恢复到健康的关节软骨的水平，表明这种新材料确实能够对已经发生退行性病变的软骨起到增强作用。

左：正常的关节软骨中存在大量糖胺聚糖，通过结合水分子来抵抗外力负荷；中：骨关节炎患者关节软骨发生退行性病变，糖胺聚糖的含量下降；右：通过添加合成的高分子材料，已发送退行性病变的关节软骨的性能可以得到恢复 （图片引自原报道）

目前这项研究还仅限于体外实验，如果真正应用于临床，研究人员仍然需要解决很多问题。例如目前研究人员使用绿光来引起聚合反应，但绿光对组织细胞的穿透能力较差，因此研究人员需要对这一材料体系进一步改进。

原文检索

《Light-activated hydrogel might one day repair degraded cartilage in arthritic joints》

《A Tissue-Penetrating Double Network Restores the Mechanical Properties of Degenerated Articular Cartilage》

（原标题：新材料或有望造福骨关节炎患者）

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