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- DUMABIO
- 上海
- DM-VIT1001
- 2025年12月05日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
6个月
- 保存条件：
2-8°
- 库存：
999
- 供应商：
上海笃玛生物科技有限公司
- 规格：
100管/48样
维生素E（Vitamin E，VE）试剂盒说明书
微量法100T/48S
测定意义
维生素E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中最主要的抗氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。
测定原理
VE还原Fe3+为Fe2+，Fe2+与1,10-菲罗啉产生有色络合物，在530nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、漩涡震荡仪。
试剂组成和配制
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体2mL×1支，4℃保存。
试剂三：液体2mL×1支，4℃保存。
试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。
样本处理
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，匀浆后用提取液定至1mL，定至在漩涡混匀仪上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）后在漩涡混匀仪上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。
3. 血清：取0.1mL，加0.9mL提取液，漩涡仪混匀上震荡5min，于25℃，5000g离心10min，取上层测定。
测定操作
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对照管 |
测定管 |
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样品（μL） |
100 |
100 |
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试剂一（μL） |
20 |
20 |
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试剂二（μL） |
20 |
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试剂三（μL） |
20 |
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充分混匀，25℃反应5min |
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试剂四（μL） |
60 |
60 |
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充分混匀，于微量石英比色皿/96孔板，无水乙醇调零，测定530nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，△A=A测定管-A对照管。 |
||
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.22x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量计算
VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反总÷（V样×Cpr）
= 9.09×（△A -0.0065）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷ 0.22×V反总÷（V样×W÷V样总）
= 9.09×（△A -0.0065）÷ W
3. 按照细胞数量计算
VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）
= 9.09×（△A -0.0065）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反总÷V样×10
= 90.9×（△A -0.0065）
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.11x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量计算
VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反总÷（V样×Cpr）
= 18.18×（△A -0.0065）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷0.11×V反总÷（V样×W÷V样总）
= 18.18×（△A -0.0065）÷ W
3. 按照细胞数量计算
VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）
= 18.18×（△A -0.0065）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷0.11×V反总÷V样×10
= 181.8×（△A -0.0065）
V反总：反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
注意事项
若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。
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文献和实验缺乏维生素 E，就会阻碍受精卵在子宫内着床后的发育，可使精细胞变性，发生退化，引起不孕症。此外，还能引起肌肉萎缩和运动麻痹。在许多哺乳动物中都可见到 E缺乏症，但在人体中，还没有得到确实的 E缺乏症的证据，一般在生物体内有防止维生素 A、胡萝卜素、脂肪等氧化的作用。亦有报道其磷酸脂可抑制琥珀酸氧化系统和抑制磷酸酶的作用，但都还未最后确定。成人每天需要量约为 30毫克的混合生育酚。定量法有吸收测定和比色法等，但因而为α，β，γ、δ都作为同一效力被测定，所以测定数值比生物学效力高，所以并不是太好的方法。
指作为动物脂溶性成长因子的维生素，缺乏这种维生素，会引起夜盲症、角膜干燥症（ xerophth- almia）、角膜软化症（ keratomalacia）以及阻碍幼小动物的生长等。也称维生素 A醇、维生素 A、抗干眼醇（ axerophtol）等，但统一为视黄醇（ reti－ hol）。有四种异构体，天然存在的主要维生素 A，有侧链双键都是反式型（最大紫外吸收为 325毫微米）和新维生素 A型（最大紫外吸收在 328毫微米）。易受空气氧化，可被氧迅速分解，对热不稳定，遇
促进血液凝固的脂溶性维生素， K是 Koagu-lation的缩写。也称抗出血性维生素。作为具此作用的物质已从天然物中分离出 K1 ， K2 ，以及合成出 K3 ， K4 ，它们都是萘醌的衍生物。维生素 K1 亦称为叶绿醌， C3 1 H46 O2 ，黄色油状。维生素 K2 亦称为金合欢醌或甲基萘醌 C41 H36 O2 。维生素 K3 就是 2-甲基 1， 4萘醌（ menadione），它是人工合成的代表性物质，有特殊臭味，作为维生素作用
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