DNA 促旋酶（E. coli）

特别提示：包括DNA 促旋酶（E. coli）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DNA 促旋酶（E. coli）
英文名称：DNA (E.) (coli)
产品货号：SV1096
产品规格：500U|100U

特性:
向 DNA 引入负超螺旋
概述:
DNA 促旋酶（E. coli）是一种 II 型拓扑异构酶，在 ATP 存在下向 DNA 中引入负超螺旋。促旋酶全酶是由两个 gyrA 亚基（97 kDa）和两个 gyrB（90 kDa）亚基组成的异源四聚体。
来源:
克隆有 gyrA 和 gyrB 基因的 E. coli 菌株。
反应条件:
1X DNA 促旋酶（E. coli）反应缓冲液
[35 mM Tris-HCl，24 mM KCl，4 mM MgCl2，2 mM DTT，1.75 mM ATP，5 mM 亚精胺，0.1 mg/ml BSA，6.5% 甘油（pH 7.5 @ 25℃）]，37℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 20 分钟。
质保声明:
DNA 促旋酶经过严格的质控检测，确保该产品具有zuì高的活性和纯度。详情请联系我们咨询。
单位定义:
1 单位是指在 30 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟内催化超过 95% 的 0.5 μg 底物（N0471）转变为超螺旋质粒所需的酶量。DNA 超螺旋化通过不含溴化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。
浓度:
5,000 units/ml。

除了DNA 促旋酶（E. coli）,，我公司还供应以下相关产品：



名称：T4聚核苷酸激酶
货号：BTN120506
规格：250U
T4聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷上。本产品还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下：


产品用途：
1．DNA或RNA的末端标记，用作寡核苷酸探针和进行DNA测序。
2．寡核苷酸5′末端的磷酸化，以便进行连接反应。
3．除去3′磷酸基团。

产品组成：

成分	规格
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	25μl
10×反应缓冲液	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1 单位指在37℃条件下，30分钟内催化 1nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量。

1×反应缓冲液：[70mM Tris-HCl(pH7.6@25℃)，10mM MgCl2，5mM DTT]，37℃温育。

热失活：65℃加热20分钟。

来源：重组E.coli菌株，克隆有T4多聚核苷酸激酶或修饰的T4多聚核苷酸激酶基因。

自备试剂：0.5M EDTA(pH8.0)、[γ-32P或γ-33P]-ATP或0.1mM ATP、DNA纯化试剂盒。

使用方法：

一、DNA 5′末端标记：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5′末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的[γ-32P或γ-33P]-ATP(3000Ci/mmol)	50pmol
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶,10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒可以向我公司订购。

二、DNA 5′末端磷酸化：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5′末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的0.1mM ATP	3μL
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。