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- DUMABIO
- 上海
- DM-VIT1005
- 2025年12月05日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
6个月
- 保存条件：
2-8°
- 库存：
999
- 供应商：
上海笃玛生物科技有限公司
- 规格：
100管/96样
维生素B6（Vitamin B6，VB6）试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
维生素B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。
测定原理
VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在390nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体70mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体1mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。
样本处理
1. 组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定。
3. 血清：直接测定。
测定操作
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空白管 |
测定管 |
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样品（μL） |
40 |
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试剂一（μL） |
40 |
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试剂二（μL） |
40 |
40 |
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试剂三（μL） |
60 |
60 |
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试剂四（μL） |
60 |
60 |
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充分混匀，25℃反应20min，于微量石英比色皿/96孔板，测定390nm处吸光值，记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。 |
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计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.3635x+0.0205，R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量计算
VB6含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×Cpr）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB6含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×W÷V样总）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB6含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB6含量（μg/mL）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷V样
= 13.76×（△A - 0.0205）
V反总：反应总体积，0.2mL；：V样：加入样本体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b．用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.1818x+0.0205，R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量计算
VB6含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V反总÷（V样×Cpr）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB6含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818 ×V反总÷（V样×W÷V样总）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB6含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB6含量（μg/mL）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V反总÷V样
=27.52×（△A - 0.0205）
V反总：反应总体积，0.2mL；：V样：加入样本体积，0.04mL；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
注意事项
1. 若测定结果中吸光值超过1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2. 蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。
3. 显色完成后立即进行测定。
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文献和实验指作为动物脂溶性成长因子的维生素，缺乏这种维生素，会引起夜盲症、角膜干燥症（ xerophth- almia）、角膜软化症（ keratomalacia）以及阻碍幼小动物的生长等。也称维生素 A醇、维生素 A、抗干眼醇（ axerophtol）等，但统一为视黄醇（ reti－ hol）。有四种异构体，天然存在的主要维生素 A，有侧链双键都是反式型（最大紫外吸收为 325毫微米）和新维生素 A型（最大紫外吸收在 328毫微米）。易受空气氧化，可被氧迅速分解，对热不稳定，遇
作为鼠的抗不孕症因子而发现的脂溶性维生素。为母育酚的衍生物，已分离出四种生育酚：α -，β -，γ -，δ -生育酚。多数存在于植物性食品中，油脂中特别多，动物性油脂中几乎不存在。为淡黄色粘稠性的油状物，能可溶于多种有机溶剂中，具有游离的酚基容易变为醌而被氧化的性质。对酸稳定，对碱不稳定。天然产品（ 1）在乙醇中的最大吸收（毫微米），（ 2）生物学的效力是 D型，左旋，效力为 DL型的 1.4倍。通常利用醋酸酯即 D－α -醋酸生育酚作为标准， 1毫克为 1国际单位。鼠
促进血液凝固的脂溶性维生素， K是 Koagu-lation的缩写。也称抗出血性维生素。作为具此作用的物质已从天然物中分离出 K1 ， K2 ，以及合成出 K3 ， K4 ，它们都是萘醌的衍生物。维生素 K1 亦称为叶绿醌， C3 1 H46 O2 ，黄色油状。维生素 K2 亦称为金合欢醌或甲基萘醌 C41 H36 O2 。维生素 K3 就是 2-甲基 1， 4萘醌（ menadione），它是人工合成的代表性物质，有特殊臭味，作为维生素作用
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