有丝分裂控制蛋白样DIS3L2抗体

做 WB 要了解的有关 SDS-PAGE 的基本知识

今日跟大家分享关于 WB 实验的要点及背后的原理。开场时，先 bia 个概念～蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即 Western Blot：它是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，通过分析着色的位置、深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。虽然此定义言简意赅，但总觉其好生硬费解，而对于得花近 2 天时间才能搞定的实验，我们如果没有较充分地理解它，就会很容易出现各种各样的 bug，最后结果也呵呵，对此自己确实深有体会。总的来说，WB 分很多种，比如 SDS

免疫沉淀原理

结果，不仅需要高质量的抗体，同时对免疫沉淀体系也需要有严格的控制指标。免疫沉淀实验从：蛋白样品处理；抗体-agarose beads孵育；抗体-agarose beads复合物洗涤到最后的鉴定，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个关键步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。 IP实验步骤 基本实验步骤 1. 收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或者4℃裂解30 min， 12 000g离心30 min后取上清； 2. 取少量裂解液以备Western blot分析

实战指南——免疫共沉淀篇（进阶）

以内，内源性蛋白水平会因为相应的外源蛋白表达而适当下调），这样的细胞株可以用于模拟内源性蛋白的相互作用；因为理论上未改变细胞的生理特异，相应的生命过程仍受内源因素调控。 当然构建相应的细胞株需要转染并筛选，又因为要控制表达量水平，筛选工作耗时更长；并且细胞状态会因为传代过多而有些改变。因此，绝对的内源性蛋白的相互作用仍是一个不可或缺的数据，尤其对一个新发现的蛋白复合体。 IP内源性蛋白首先要确认相应的抗体是否能够用于IP。能够用于IP的抗体，通常其识别区域恰是天然状态下靶蛋白暴露于外的区段，常