iTRAQ定量蛋白组学

iTRAQ

iTRAQ的4种同位素标记试剂由４种相对分子质量分别为114、115、116和117的报告基团(reportergroup)，相对分子质量分别为31、30、29 和28 的质量平衡基团(balancegroup)以及一个相同的肽反应标记试剂基团(peptide reactivegroup)组成。不同的报告基团分别与相应的平衡基团相配后，相对分子质量均为145，即等量异位标签(isobaric tag)。
将蛋白质裂解为肽段，然后用iTRAQ试剂进行差异标记。由于iTRAQ试剂是等量的，即不同同位素在标记同一多肽后在第一级质谱检测，分子量完全相同，用串联质谱方法对在第一级质谱检测到前体离子(precursorion)进行碰撞诱导解离，产物离子通过第二级质谱进行分析。在二级质谱分析过程中，报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂，质量平衡基团丢失，产生低质荷比(m/z)的报告离子。由于二级质谱可分析相对分子质量相差1的报告基团，不同报告基团离子强度的差异就代表了它所标记的多肽的相对丰度。同时，多肽内的酰胺键断裂，形成一系列b离子和y 离子，得到离子片段的质量数，通过数据库查询和比较，可以鉴定出相应的蛋白质前体.

技术特点:
1．可同时标记2~8 个样本。
2. iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白，还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3.可标记修饰后的氨基酸，因此对磷酸化蛋白等翻译后修饰蛋白进行定性定量研究。
4.报告离子的相对分子质量较低(113~121)，低分子量区是质谱定性(质量确定)和定量(丰度比较)较为准确的区域，因此质谱检测更为灵敏可靠。