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文献和实验心脏研究中常用的 AAV 血清型 天然的 AAV 血清型中,AAV1、AAV6、AAV8、AAV9、AAVrh.10 和 AAVrh.74 对心脏有较好的感染效率,其中: 小鼠静脉或心肌注射:AAV9 > AAV8 > AAV6 > AAV1 > AAV2(图 3-5) 大动物心肌注射:AAV6 ≥ AAV1 > AAV9(图 6) 小鼠体内:AAV9 > AAVrh.74 ≥ AAVrh.10(图 7) 图 3. 五种 AAV 血清型在小鼠体内的心脏基因递送效率比较。注射方式为颈
继续寻找合适成对 sgRNA 序列。04 根据找到的合适的 sgRNA 订购 oligo图为 U6 真核表达载体设计,Forward oligo:5'-ACGG, Reverse oligo:5'-AAAC。05 关于 cas9 的几个注意事项1)CRISPR-cas9 最主要的要求:PAM 序列为 NGG。2)sgRNA,即 cas9 guide RNA,是引导 cas9 蛋白在基因编辑位点进行定向切割,所以一般是 20 个碱基,不含 PAM 序列。3)设计的 sgRNA 一定有效吗?一般设计
首先给大家介绍的是 Cas9 质粒构建的第一个拦路虎,如何寻找目的基因的 CDS 序列。1. 在 NCBI 的 Gene 数据库中输入目的基因名称(以 p53 为例)2. 找到对应种属的目的基因,这里选择人源的话是第二个、点击(方框内)3. 进入后找到 Genebank 选项、点击(往下拉慢慢看)4. 进入后找到 CDS 区中的 CCDS(方框中),点击5. 找到对应的 CDS 区6. 将红色以及蓝色的部分间隔的输入麻省理工设计 gRNA 评分网址后根据评分选择分数较高的 3-5 对 gRNA 即可
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