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- 流式细胞检测服务
- 2025年12月31日
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- 服务名称：
细胞实验技术服务
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
操作流程与关键设备
标准操作步骤：
- 样本制备：制备单细胞悬液（如外周血、组织消化液），避免细胞聚集[59][70]。
- 荧光标记：使用特异性抗体或染料（如PI、Calcein-AM）标记目标分子，需优化抗体浓度与荧光通道兼容性[14][64]。
- 仪器操作：
- 开机校准：检查鞘液/废液桶、激光稳定性、光路补偿[79]。
- 数据采集：设置阈值、调整增益与补偿，避免信号溢漏[64][75]。
- 数据分析：通过软件（如FlowJo）进行门控策略设计，计算阳性细胞百分比或平均荧光强度（MFI）[59][61]。
关键设备：
- 流式细胞仪（如BD FACSCanto、CytoFLEX）
- 荧光标记试剂（多色抗体面板）
- 数据分析软件（支持自动化补偿与AI驱动聚类）[52][122]
与其他技术的对比
与荧光显微镜相比，流式细胞术的优势与局限：
| 对比维度 | 流式细胞术 | 荧光显微镜 |
|---|---|---|
| 通量 | 高通量（每秒数千细胞） | 低通量（每分钟约100细胞） |
| 数据客观性 | 定量分析，支持统计学处理 | 依赖主观判断，定性为主 |
| 检测参数 | 多色荧光（>10色）、散射光 | 单色/双色荧光，侧重形态学观察 |
| 适用场景 | 快速分选、大样本筛查 | 细胞相互作用、亚细胞定位 |
| 样本要求 | 需单细胞悬液 | 支持组织切片、活细胞成像 |
| 成本与复杂性 | 设备昂贵，操作需培训 | 成本较低，操作简便 |
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文献和实验量为35~36kD的Ca2 +依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 2、Q：用流式作细胞凋亡为什么跟tunel差别那么大啊？？tunel测出来的细胞凋亡率大概有30%而作流式测出来的凋亡率只有2%（阴性
脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 2. Q：用流式作细胞凋亡为什么跟tunel差别那么大啊？ A：tunel测出来的细胞凋亡率大概有30%而作流式测出来的凋亡率只有2%（阴性对照0.5%）差别好大啊，用的是beckman公司的Annexin V /PI双染试剂盒，实验步骤如下：
1. Q：要做胃粘膜组织的DNA含量及倍体检查，但取材后要等几个星期才会做流式细胞术检查，请问：胃组织要怎样保存好呢？用低温保存，还是用乙醇固定？或者固定后再低温下保存？A：我做过乳腺细胞的DNA含量测定，取得组织以后，先处理成单细胞悬液，然后再加70%冰乙醇固定，要保证冰乙醇的最终浓度为50%，这样固定的细胞悬液可以至少保存12小时，最多可保存一个月，上机检测前再加PI综合染液。我就是这样做的，保存了将近三个星期，结果还可以，变异系数为5%.2. 实验中想用PI分析细胞周期及凋亡
