Endo H, Endo Hf

Endo H_f
#P0703S          100,000 units     ¥669
#P0703L           500,000 units    ¥2,679

RNase B (对照底物)
#P7817S           250 μg             ¥ 669.00

糖苷内切酶反应缓冲液
10X G5 和 G7 反应缓冲液
10X 糖蛋白变性缓冲液
10% NP-40
#B0701S                                  ¥ 129.00

♦ 去除高甘露糖型蛋白质中的糖类残基

糖苷内切酶 H 是一种重组糖苷酶，能够对N-糖蛋白中的高甘露糖型和某些杂合型寡聚糖的壳二糖核心结构进行切割（1）。

糖苷内切酶 H_f 是糖苷内切酶H和麦芽糖结合蛋白组成的融合重组蛋白，具有与糖苷内切酶 H 相同的活性。

糖苷内切酶 H 和糖苷内切酶 H_f 克隆自褶皱链霉菌（Streptomyces plicatus ）（2），在 E.coli 中表达（3）。

在糖蛋白变性缓冲液（含 5% SDS，40 mM DTT）中 100 ℃煮沸 10 分钟使糖蛋白变性。在 1X G5 反应缓冲液 [50 mM柠檬酸钠（pH 5.5 @ 25 ℃）] 中于 37 ℃ 温育，以进行酶解反应。

10X 糖蛋白变性缓冲液
10X G5 缓冲液

Endo H：~400,000 units/mg
Endo H_f ：~165,000 units/mg

Endo H：29 kDa
Endo H_f ：70 kDa

无外切糖苷酶污染，无蛋白水解活性。

1 单位指在 10 μl 的反应体系中，37 ℃ 条件下 1 小时从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95% 的碳水化合物所需要的酶量（10 NEB units = 1 IUB milliunit）。

Endo H：500,000 units/ml
Endo H_f ：1,000,000 units/ml

20 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25 ℃），50 mMNaCl 和 5 mM Na₂ EDTA，贮存于-20 ℃。

酶的活性不受 SDS 抑制。

要使天然糖蛋白去糖基化，或许需要增加酶量和延长温育时间。

 

 

 

 

 

 

标准条件下3,000单位Endo H或Endo Hf与60 mg RNase B温育。测不同时间碳水化合物去除的百分比。[Dubois et al.(1956) Anal. Chem. 28, 350-356]。

 

 

 

 

Endo H 晶体 (Dr. Patrick Van Roey)

 

                                                                      

 

 

迁移率变化分析。 在标准检测条件下，10 μg 的 RNnase B 与 1 unit 的 Endo H、Endo H_f 或 PNGase F 共同温
育，在不同的时间点，取少量反应液于 10-20 % 的 SDS 凝胶电泳检测碳水化合物（CHO）的释放。

(1) Maley, F.et.al.(1989) Anal.Biochem., 180, 195-204.
(2) Robbins, P.et.al (1984) J.Biol.Chem .,259, 7577-7583.
(3) Guan, C.and Wong, S.New England Biolabs, Inc., unpublished results.