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小牛肠碱性磷酶(CIP)

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    ♦ 除去 DNA、RNA、rNTPs 和 dNTPs 5' 末端的磷酸基团
    ♦ 防止克隆载体的自身环化连接
    ♦ 蛋白质丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的去磷酸化
    ♦ 为5' 末端标记准备模板


    概述
    碱性磷酸酶能催化除去DNA、RNA、三磷酸核糖核苷和三磷酸脱氧核糖核苷的5′磷酸基团。由于CIP处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端,因此它们不能进行自连接(1)。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。


    来源
    小牛肠粘膜。


    反应条件
    1X NEBuffer 3
    [100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2 ,1 mM DTT (pH 7.9 @25°C)]。
    另外,CIP 在 NEBuffers 2、4 以及 EcoRI 和 BamHI 的反应缓冲液中均有活性。


    质保声明
    由 NEB 在芬兰的合作公司 Finnzymes Oy 对 CIP 进行核酸内切酶、外切酶和 RNA 酶污染的检测,质量控制在 Finnzymes Oy 公司进行,并经 NEB 认证。


    单位定义
    1单位指在1 ml反应体系中,37°C、1分钟催化1 μmo l的对硝基苯磷酸盐( pNPP)水解成对硝基酚(pNP)所需的酶量(2)。


    活性检测条件
    1 M 乙二胺-HCl ( pH 9.8),0.5 mM MgCl2 ,10 mM 对硝基苯磷酸盐,这些条件仅用于定量检测酶活力。


    浓度
    10,000 units/ml。


    贮存条件
    50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM MgCl2 , 0.1 mM ZnCl2 和50%甘油,-20°C贮存。


    热失活
    无。


    参考文献
    (1) Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual , (2nd ed.), (p. 5.72). Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
    (2) Mossner, E., Boll, M. and Pfleiderer, G. (1980) Hoppe-Seyler’s Z. Physiol. Chem ., 361, 543–549.


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