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- 2026年01月22日
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文献和实验一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu（Pyrococcus furiosus）DNA聚合酶，具有完整的3‘外切酶校读活性（3'-editing-exonuclease），可以将每个循环中碱基的错配率由10*-4降到10*-3，从而提高PCR产物的准确性。但它在扩增1.5-2.0 kb 片段时，效率比Klentaq l（Taq DNA聚酶N-末端缺失突变体，类似于E.coli DNA
比Klentaq l(Taq DNA 聚酶N-末端缺失突变体，类似于E.coli DNA 聚合酶Ｉ Klenow片段）或AmpliTaq（全长的Taq DNA 聚合酶）等聚合酶差；在扩增5.0-7.0kb片段时亦不比各种形式的Taq DNA 聚合酶（如Ampli Taq、Klentaq 1、Klentaq 5等N-末端缺失的变异株）有明显优越之处。因而以往的PCR 反应产物限制在5.0kb以内。超出这一范围，PCR 扩增反应效率将明显下降，同时产物会降解。即使将延伸时间定为30分钟（10倍于通常所需）亦无改进
一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性： 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furiosus)DNA 聚合酶 ，具有完整的3’外切酶校读活性（3’-editing-exonuclease），可以将每个循环中碱基的错配率由10*-4降到10*-3，从而提高PCR产物的准确性。但它在扩增1.5-2.0kb片段时，效率比Klentaq l(Taq
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