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文献和实验与内参蛋白分子量相差 5KDa 以上。比如检测目的蛋白分子量为 45KDa,此时不适宜选择 β-actin(42KDa)作为内参,可以考虑选择 GAPDH(36KDa)作为内参。 二、种属 不同种属的样本内参蛋白不同。 如哺乳动物的组织或者细胞样本,通常选择 β-actin、β-tubulin、GAPDH;植物来源实验样本,则可以选择 Plant actin、Rubisco等。 三、定位 不同表达部位内参蛋白不同 四、样品前处理(常常被忽略的内参选择因素) 内参的选择还需要考虑实际
(pre-stained)好用,因为电泳过程中完全看不到,要和目标蛋白一起等到最后染色才“开蛊”,无法对实验起预示参照作用。完全属于“后知后觉”型的,当然还是比“不知不觉”不做对照的要好。 ① 宽分子量蛋白标准 如果从实验室总体考虑的,就选范围尽量宽,条带分布比较均匀的,这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断,避免正好落在一段空白区的危险。不过条带越多,每次上样量也就越费。拿到Marker后,如果买的是大包装,就应该考虑分装。多次反复冻融对于蛋白的危险,不用多说吧。另外要记得,宽
10kDa 干扰素γ诱导蛋白(IP10)在牛生物样本中的精确检测实验
为了便于计算,尽管浓度为自变量而 O.D. 值为因变量,我们绘图时仍采用标准品的 O.D. 值作为横坐标 (X 轴),标准品的浓度为纵坐标 (Y 轴)。同时为了试验结果的直观性,图中提供的是原始数据而非对数值。推荐使用对数 值建立标准曲线图。由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和温度条件等),标准曲线的 O.D. 值会有所差异。所提供的标准曲线仅供参考,实验者需要根据自已的实验建立标准曲线。牛 10kDa 干扰素γ诱导蛋白 (IP10) 检测试剂盒标准曲线检测范围
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