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文献和实验(pre-stained)好用,因为电泳过程中完全看不到,要和目标蛋白一起等到最后染色才“开蛊”,无法对实验起预示参照作用。完全属于“后知后觉”型的,当然还是比“不知不觉”不做对照的要好。 ① 宽分子量蛋白标准 如果从实验室总体考虑的,就选范围尽量宽,条带分布比较均匀的,这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断,避免正好落在一段空白区的危险。不过条带越多,每次上样量也就越费。拿到Marker后,如果买的是大包装,就应该考虑分装。多次反复冻融对于蛋白的危险,不用多说吧。另外要记得,宽
时间:60 min 这个条件除了100 KDa的预染maker转的不好,剩下的条带都非常清晰。正向前面ycwzq说的,感觉时间不是很重要,只要蛋白别太小或太大,在一个比较宽的时间和电压范围都能转上。当然这些还有一个重要的影响因素就是所用的蛋白转印缓冲液。 所以建议把自己用的转印缓冲液的配方也贴上,便于分析交流。 我先说我的吧,是大师兄师姐的配方,我用了感觉还不错,但是100 KDa以上的转的不好。 蛋白转印缓冲液pH8.2:Tris碱1.93 g,甘氨酸9 g
国产 10次 300 蛋白质研究 中分子量蛋白标准(14-97KD) 国产 200ug 60 预染低范围蛋白质分子量标准 自产 20次 280 低分子量蛋白标准(6.5-66KD ) Sigma M3913 20 280 高分子量蛋白标准(36-205KD) Sigma M3788 20 280 宽范围分子量蛋白标准(6.5-205KD) Sigma M4038 20 280 ECL超敏发光液(western blot)
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