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上海善然生物科技有限公司
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Corning 透明平底96孔板(9017),25/包
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文献和实验IN Cell Analyzer 2000:斑马鱼自动化全孔成像
制备: 斑马鱼 幼虫样品是由Phylonix Inc.馈赠的。受精后5天的野生型斑马鱼先在三卡因中麻痹,再用4%多聚甲醛固定。幼虫放置在#3599 Corning Costar 96孔板的150 μl固定培养基中。 图像获取: 图像是用IN Cell Analyzer 2000获取的。物镜为:2×/0.1 NA、4×/0.1 NA、10×/0.45 NA,利用透射光和荧光模式及适当的滤光片和曝光时间。大CCD照相机((Photometrics CoolSnap K4
ul 0ul 其次,将以上浓度的标准溶液依次加入96孔板中,每孔加40ul,制作平行孔。之后,将样品上清液用1×PBS稀释50倍(或100倍),混匀,以每孔40ul加入上述96孔板中,制作平行孔。 根据不同浓度BSA在595 nm的不同的紫外光吸光值,用酶标仪测定样品在595 nm处的吸光值,用excel求出一元线性回归方程(y=kx+b),其中y是吸光值,x是测定的样品上清液的浓度,求出
ml细胞重悬液。 (4)用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液,每孔加0.5×103-10×103 个细胞。 (5)将200μl培养基加至第1列和第12列的8个孔中。第1列作读板议的空白对照。 (6)将培养板放至塑料饭盒中,于37℃湿润环境中温育1-3天,等细胞进入指数生长期时可加入药物。 添加药物 (7)用培养基将细胞毒性药物5倍系列稀释,共制备8个浓度。 (8)对于贴壁生长的细胞,去除第2-11列各孔的培养基。 (9)在第2列和第11列的8个孔中加入200μl
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