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SUPERSCRIPT 1ST STRAND SYSTEM FOR RT-PCR
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上海善然生物科技有限公司
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Invitrogen公司SuperScript®逆转录酶家族
cDNA第一链合成试剂盒 11904018 SUPERSCRIPT 1ST STRAND SYSTEM FOR RT-PCR
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温馨提示:不可用于临床治疗。
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文献和实验,从而节省了花费在筛选大量PCR产物上的时间。图一 示意GeneRacer™的工作原理。RNA样品经CIP和TAP处理,保证GeneRacer™寡聚RNA仅同全长转录本连接。然后使用SuperScriptⅡ逆转录酶对这些转录本逆转录,得到的cDNA做为PCR的模板。GeneRacer™寡聚RNA序列做为GeneRacer™ 5’引物结合位点,这样,只有具有全长5’末端的cDNA才会被扩增。使用GeneRacer™步骤及高保真度Platinum® Taq DNA聚合酶,就可以确保得到最高效的实验结果。敏感
Invitrogen 性能卓越的系统整合了可以利用的最好的RT技术,包括SuperScript™ III RT和最新推出的Thermo-X™ RT。SuperScript™ III RT是M-MLV RT基因工程升级版本,减少了RNaseH活性,提供更高的热稳定性(1-3)。这种酶可以在高达55℃的情况下合成cDNA,比以前使用的反转录酶提供更高的特异性,更高的cDNA产量以及更多的全长产物。Thermo-X™ RT克隆自一种嗜热真细菌,提供高达70℃的热稳定
分离高质量RNA 成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般的RNA纯化方法是使用异硫氰酸胍/酸性酚的一步法。Trizol试剂法(见下图)将一步法加以提高,可以从多种组织和细胞中提取高质量的非降解RNA。Trizol试剂法可以从最少100个细胞或1mg组织中提取RNA。TRIzol®试剂步骤略图 一般不必使用oligo(dT)选择性分离poly
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