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文献和实验实验原理 胞浆内存在糖原或多糖类物质(如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等)中的乙二醇基(CHOH-CHOH)经过碘酸(periodicacid)氧化,转变为二醛基(CHO-CHO),与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合,形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。该反应称为过碘酸-雪夫 (PAS)阳性反应,以前也称为糖原染色。 实验试剂 1. 高碘酸氧化液: HIO4 ·2H2 O1g, 蒸馏水加
酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 1. 原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。 2. 标记步骤: (1) 称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置过夜。 (2) 反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制
,一般只有2-4%的酶与蛋白质结合。4. 试剂及器材(1)0.1M PH6.8磷酸缓冲盐水(PBS):取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml,NaCl1.8克,加蒸馏水至200ml。(2)1.25%戊二醛液:取25%戊二醛50ml与PH6.8的PBS 1ml混合。(3)1M PH9.5碳酸盐缓冲液:取1M碳酸钠3ml与1M碳酸氢钠7ml混合。(4)0.2M赖氨酸溶液:称赖氨酸29.2mg溶于0.01M PH9.5碳酸缓冲液1ml中。 (5)0.15M PH7.4 PBS及生理
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