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- 2025年07月14日
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100
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上海古朵生物有限公司
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10ml
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文献和实验以除去少量未裂解的细胞以及细胞碎片。上清重新离心30000g 30 min沉淀溶酶体。将溶酶体溶于0.34M蔗糖溶液中，重复低、高速离心。最后将溶酶体冷冻-20℃直到使用。 白细胞溶酶体提取物在0.2M的醋酸缓冲液中匀浆（pH4.0）之后30000g离心10min取上清。重复3次左右，到几乎没有酶再溶出。（测A280衡量 Sephrose-trasylol 层析： 将溶酶体提取物调节pH 8.0 ：1、滴加2M Tris（unbuffered）；2、用pH8.0的Tris（0.05
2. 离心收集菌体菌体 经离心（5000g，5min）后，悬浮于终止缓冲液中（200mM Tris-HCl，pH8.0; 20 mM EDTA; 20 mM Na2N3; 20 mM 金精三羧酸(ATA)） 3. 菌体裂解 加入STET缓冲液(8% 蔗糖; 5% Triton X-100; 50mM EDTA; 50mM Tris-HCl pH 7.0)悬浮加入0.2 M 的VRC (0.2M和10 mM的氧钒核苷复合物) 4. RNA
酶 （4）1.0M MgCl2 （5）2mg/ml DNA酶I，溶于50%甘油，75mM NaCl （6）Triton-X 100 （7）1M DTT （8）重悬液（PH8.0）50mM Tris-HCl(PH8.0)25%(W/V) 蔗糖 1mM EDTA 0.1%(W/V) 叠氮钠 10mM DTT(新鲜加入) （9）洗涤液I(PH 8.0)50mM Tris-HCl(PH8.0)0.5% Triton-X 100 100mM NaCl 1mM
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