- 询价
- KAPA
- KK4960/KK4961/KK4962/KK4963
- 2025年07月08日
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
3*100次
二代测序中样本DNA的质量和数量对文库构建的结果具有非常大的影响。目前二代测序文库构建时，常规主要采用分光光度计和电泳法进行定量（例如NanoDrop、PicoGreen或Bioanalyzer），而其结果往往与真实结果存在较大的出入，主要缺点体现在：1）样本稀释后定量不准；2）无法区分总DNA中的有效DNA片段；3）对污染物敏感，导致测定的有效目的DNA浓度过高或过低。
KAPA人类基因组DNA定量及质控试剂盒主要用来解决二代测序文库构建前模板DNA定量和质检的问题。KAPA独创人类基因组DNA定量及质检方法，保证后二代测序结果的真实可靠和高成功率。对低浓度或复杂来源人类基因组DNA而言，二代测序建库之前的定量和质检尤为重要。
产品表现
1）准确定量低浓度DNA： qPCR法定量低浓度DNA，结果更准确
上图所示，6个2倍浓度梯度稀释的DNA样品，从2.5ng/µl到0.09ng/µl，分别用NanoDrop、PicoGreen、qPCR法进行定量。结果显示qPCR法的结果更准，均匀性更好。
2）利用Q-比值来评价模板DNA的质量
如上图所示：相同的标准品设置，产生三种标准曲线，扩增高度保守的人类单拷贝数基因，片段长度分别为41bp、129bp、305bp。其中41bp的片段被用来对样本进行绝对定量，而129bp、305bp片段来判断DNA的质量。DNA质量不高会严重影响较长片段的扩增效率，因此可通过Q-129、Q-305与Q-41的比值，来推断样本DNA的质量。通过 “Q-比值”，可以推测模板DNA的质量并预测文库构建和测序的成功概率。
3）通过Q-比值来预测FFPE来源样本文库构建的成功概率
上图：FFPE样本来源DNA的Q-比值与文库构建后产量的关系。样本DNA质量差，直接降低文库扩增的效率，尤其是片段长度稍长的情况下。一般情况下，用较短片段的Q-比值（Q-41）来进行定量，用较长片段的Q-比值（Q-129、Q-305）来判断文库DNA的质量。左图通过Q-比值来推断5个人类FFPE来源DNA样本的质量。这些样本的Q-比值与文库构建（Library Construcion,LC）的质量有非常大的直接关系。(数据来源：Mirna Jarosz和Frank Juhn, Fundation Medicine, Cambridge, MA, USA)。
4）通过Q-比值来推测片段大小和测序的质量
从人类全基因组测序结果中挑选10个人类基因组样本，其尺寸的实际片段大小（~bp）与预测值相比偏小。所有的样本都是通过标准的文库构建流程进行全基因组测序，模板DNA的起始量为100ng。采用Sage Science Pippin Prep选择片段，割胶选择500bp左右。
上图：Q305/Q41的比值由上至下逐渐降低，主要说明：
1.样本DNA打断后，尺寸大小由上至下逐渐降低；
2.测序的文库片段中，小片段的量增多。
既使严格地选择片段尺寸，仍然会有会有很多小片段，这一点通过Q-比值也可以看出，小片段的存在会影响文库质量。
产品优势
1.定量低浓度的样本DNA；
2.质检来源复杂的样本DNA，如FFPE；
3.预测文库构建的成功概率、扩增产量和片段大小。
产品应用
1.福尔马林固定组织样本（FFPE），其DNA损坏程度较重；
2.激光显微切割捕获的样本；
3.提取自流式细胞的DNA；
4.血浆或血清中的游离DNA；
5.其他微量或非常珍贵的临床样本。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
性，与目的模板竞争引物和酶等，可能导致PCR扩增效率的下降，影响定量结果的准确性；另外，并不是每个基因都能在相邻的且大小合适的外显子上找到合适的跨内含子引物，所以，很大部分实验需要在一个外显子上设计引物，这时就必须经过去除基因组DNA步骤，才能得到准确可靠的结果。 传统基因组DNA去除的方法采用对RNA进行处理，由于引入了蛋白（DNase I），后续需要进行氯仿抽提纯化，操作繁琐，耗时长，RNA的回收率低。TIANGEN公司的FastQuantcDNA第一链合成试剂盒（KR106
450μl的苯酚/氯仿/异戊醇，振荡混匀， 4℃离心。12000g ×10min。⑦小心移出上清于一新Eppendorf管中，加入2 /3倍体积异丙醇，混匀， 4℃离心12000g×5min。⑧1. 0ml预冷的70%乙醇洗涤沉淀1 ～2次，沉淀在室温下晾干。⑨沉淀溶于50μlTE (含RNaseA 20μg/ml) ， 37℃水浴30min 以降解RNA 分子， - 20℃保存备用。1. 2. 2 质粒DNA 的定量及杂质检测 各取样品10μl释稀200 倍后，分别测定OD260 和OD280
中是否含有逆转录/扩增抑制剂（图 2）。 表 1：阳性内对照和相关试剂盒 图 2：通过 IPC 提示体系中抑制剂的存在。实验结果为同样浓度的 RNA 加入相同拷贝 Xeno IPC，在不同浓度的扩增抑制剂血红素存在下（0-4μM），Xeno IPC 的 Ct 值与目标 RNA 的 Ct 值定量结果。 阳性样本对照 Positive Sample Control 阳性内对照虽然可以在一定程度上反应核酸提取效率，但是却很难反馈提取流程中对核酸释放的效率。一些病原体的样本，尤其是含有革兰
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
